ГОСТ Р ИСО 21527-1—2010
9.2 Инокуляция и инкубация
9.2.1 На одну агаровую пластинку с DRBC (5.2.1) переносят с помощью стерильной пипетки (6.2)
0.1 см3испытательного образца, если это жидкость, или 0.1 см3исходной суспензии — в случае других
продуктов (раздел 8).
На вторую агаровую пластинкус DRBC переносят с помощью новой стерильной пипетки 0.1 см3пер
вого десятикратного (1(H) разведения (жидкий продукт) или 0,1 см3разведения 10-2(другие продукты).
Для облегчения подсчета низких популяций дрожжевых и плесневых грибов объемы, вплоть до
0.3 см3разведения 10~1пробы или испытательного образца, в случае жидкости можно нанести на три
пластинки.
Эти операции повторяют с последующими разведениями, используя новую стерильную пипетку
для каждого десятикратного разведения.
П р и м е ч а н и е — Если предполагается присутствие быстрорастущих плесневых грибов, следует исполь
зовать ИСО 21527-2 [6].
9.2.2 Жидкостьраспределяют по поверхности агаровой пластинки стерильным шпателем (6.8) до
тех пор. пока она не будет полностью абсорбирована в среду.
Для инокуляции пластинок можно также использовать наливной метод, но в этом случае эквива
лентность результатов должна быть валидирована при сравнении с поверхностной инокуляцией, и раз
личение. и дифференцирование плесневых и дрожжевых грибов не приемлемы. Метод нанесения на
поверхность может дать более высокие результаты подсчета. Поверхностный метод обеспечивает мак
симальное воздействие атмосферного кислорода на клетки и предотвращает риск тепловой инактива ции
грибных пропагул. Результаты могут зависеть от типа грибов.
9.2.3 Приготовленные пластинки (9.2.2) инкубируют аэробно, с крышками наверху, в прямом по
ложении в инкубаторе (6.1) при (25
±
1)еС в течение пяти дней. При необходимости агаровые пластинки
выдерживают на рассеянном свете от одного до двух дней.
Рекомендуется инкубировать чашки (6.6) в открытом пластмассовом пакете во избежание загряз
нения инкубатора в случае разрастания плесневых грибов из чашек.
9.3 Подсчет и отбор колоний для подтверждения
Считывают пластинки в промежутке от двухдо пяти дней инкубации. Отбирают чашки (9.2.3). содер
жащие меньше 150 колоний/пропагул/зародышей. и подсчитывают эти колонии/пропагулы/эародыши.
Если возникают трудности из-за быстрорастущих плесневых грибов, подсчитывают колонии/пропагу
лы/зародыши через два дня и снова через пять дней инкубации.
П р и м е ч а н и я
1 Методы подсчета дрожжевых и особенно плесневых грибов не являются точными, потому что они состоят
из смеси мицелия и спор бесполого и полового размножения. Количества колонивобразующих единиц зависят от
степени фрагментации мицелий и соотношения спор, способных расти на питательной среде.
2 Часто имеет место нелинейность подсчетов при инокуляции с использованием разведений, т. е. 10-крат
ные разведения часто не дают 10-кратного уменьшения количества колоний, полученных на питательной среде.
Это относят за счет фрагментации мицелия и разрыва скоплений спор во время разведения, помимо
конкурентного ингибирования, когда на пластинах вырастает большое число колоний.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ! Споры плесневых грибов рассеиваются в воздухе с большой легкостью, поэ
тому при работе с чашками Петри следует соблюдать осторожность во избежание развития сателлит-
ных колоний, которые дают завышенную оценку популяции в образце.
При необходимости, проводят исследование с помощью бинокулярной лупы (6.9) или микроско
па (6.7) для различения клеток дрожжевых или плесневых грибов и бактерий от колоний.
Подсчитывают колонии дрожжевых грибов и колонии/пропагулы плесневых грибов по отдельнос
ти, если необходимо.
Для идентификации дрожжевых и плесневых грибов отделяют области грибного роста и удаляют
для высокоэффективного микроскопического анализа или инокулируют на подходящую разделитель
ную или идентификационную среду.
10 Обработка результатов
См. ИСО 7218.
При необходимости регистрируют колонии дрожжевых грибов и колонии/пропагулы плесневых
грибов отдельно.
6