ГОСТ Р 52347—2005
Следует обращать внимание на правильность автоматической разметки начала и конца пика
триптофана и при необходимости дополнительно пользоваться ручной разметкой.
7.2.10.4 Контроль стабильности градуировочной характеристики
Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят непосредственно перед из
мерениями испытуемых растворов путем записи электрофореграммы градуировочного раствора
(7.2.8.3).
Градуировку признают стабильной, если отклонение найденной массовой концентрации от задан
ного значения не превышает 5 %. В противном случае анализируют градуировочный раствор еще два
раза. При повторных отклонениях, превышающих указанные нормативы хотя бы один раз. градуировку
системы проводят заново, начиная с приготовления нового запасного раствора (7.2.8.1).
7.3 Проведение испытания
7.3.1 Проведение гидролиза и получение испытуемого раствора
Навеску исследуемого продукта массой 0.1000 г помещают в стеклянную виалу или ампулу с
перетяжкой (см. 6.3.1), добавляют 5 см3раствора гидроокиси бария (7.2.3). Виалу с плотно завинченной
крышкой или запаянную ампулу помещают в эксикатор, который ставят в сушильный шкаф на 14—16 ч
при температуре 110 °С (оставляют на ночь).
По окончании гидролиза горячий гидролизат из виалы или ампулы количественно переносят в
мерную колбу вместимостью 100 см3, в которую предварительно помещено 40—50 см3дистиллирован
ной воды, добавляют 1—3 капли индикатора метилового красного (7.2.5) и нейтрализуют раствор,
добавив сначала 3.5 см3 раствора серной кислоты (7.2.4). а затем добавляют раствор серной кислоты по
каплям до перехода окраски из желтой в розовую. Затем доводят объем раствора до метки дистил
лированной водой, перемешивают, оставляют на 10—15 мин до просветления раствора над осадком
сульфата бария. 1.0 см3 полученного раствора помещают в пробирку Эппендорфа, центрифугируют
2—3 мин при 6000 об/мин. после чего 0,5 см3 раствора переносят в сухую пробирку Эппендорфа и
используют для анализа (испытуемый раствор).
7.3.2 Анализ испытуемого раствора
Для каждой пробы записывают не менее двух электрофореграмм. Параметры ввода и анализа
испытуемого раствора по 7.2.10.1. 7.2.10.2. По окончании анализа проверяют правильность идентифи
кации и разметки пиков, после чего формируют отчет с указанием метода расчета «Заказной».
П р и м е ч а н и е — На электрофореграмме пробы могут наблюдаться лики, соответствующие другим ами
нокислотам. в частности метионину, поведение которого в рамкахданной методики не рассматривается, поскольку
известно, что происходит частичная потеря этой аминокислоты при щелочном гидролизе. Показано отсутствие
мешающего влияния сопутствующих аминокислот количественному определению триптофана.
7.4 Обработка результатов
7.4.1 Массовую долю триптофана X. %. вычисляют по формуле
Х = £ Ь = . ю о.(3)
т
где С — массовая концентрация триптофана в испытуемом растворе, измеренная по 7.3.2. мг/дм3;
VrtW
— объем испытуемого раствора, 0,1 дм3;
т
— масса навески. 100 мг;
100 — коэффициент пересчета в проценты.
7.4.2 Вычисления выполняют с точностью до третьего десятичного знака с последующим округле
нием результатов до второго десятичного знака.
7.5 Оформление результатов
При анализе каждой пробы выполняютдва параллельных определения, начиная со взятия навески
испытуемой пробы. Если расхождение между результатами параллельных определений не превышает
допустимое |Х, —
х2|
й
0,01
гХ,
где X,. Х2. X — результат первого и второго параллельных определений и
их среднеарифметическое значение соответственно, то среднеарифметическое значение принимают за
результат анализа. В противном случав получают еще два результата определений и вычисляют
окончательный результат анализа пробы по 5.2 ГОСТ Р ИСО 5725-6.
Значения повторяемости (г) и воспроизводимости (
R
) приведены в таблице 5.
11