ГОСТ Р 52347—2005
30—40 см3дистиллированной воды, перемешивают до полного растворения (при необходимости нагре
вают на водяной бане). Объем в колбе доводят до метки дистиллированной водой и снова перемеши
вают. Срок хранения в герметично закрытой посуде в холодильнике — 2 мес.
7.2.8.2 Приготовление запасного раствора триптофана массовой концентрации 0.1 мг/см3
5 см3 запасного раствора триптофана массовой концентрации 1.0 мг/см3 (7.2.8.1) помещают в
мерную колбу вместимостью 50 см3,доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают. Срок
хранения в герметично закрытой посуде в холодильнике — 2 мес.
7.2.8.3 Приготовление градуировочного раствора триптофана массовой концентрации 5 мг/дм3
2.5 см3 запасного раствора триптофана массовой концентрации 0.1 мг/см3 (7.2.8.2) помещают в
мерную колбу вместимостью 50 см3,доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают. Срок
хранения в герметично закрытой посуде в холодильнике — 14 сут.
Для построения градуировочного графика приготовленный раствор анализируют по 7.2.10.
7.2.9 Подготовка капилляра к работе
7.2.9.1 Подготовка нового капилляра к работе — по 6.2.4.1.
7.2.3.2 Ежедневная подготовка капилляра к работе
Если капилляр оставляли на ночь заполненным дистиллированной водой, то перед работой его
необходимо промыть гидроокисью натрия (6.2.1.2) и дистиллированной водой по 5 мин и затем раство
ром ведущего электролита в течение времени, предусмотренного методикой для режима «Анализ».
Далее надо проверить состояние капилляра, проанализировав градуировочный раствор триптофана
(7.2.8.3). При этом, в первую очередь, обращают внимание на воспроизводимость времени выхода, а
затем — на стабильность градуировочной характеристики.
В том случае, если накануне капилляр был оставлен заполненным раствором ведущего электро
лита. его не промывают гидроокисью натрия. Растворы ведущего электролита в рабочих и промывочных
пробирках заменяют свежими порциями и промывают капилляр только раствором ведущего электроли та,
после чего контролируют стабильность градуировочной характеристики.
7.2.9.3 Хранение капилляра
При ежедневной работе рекомендуется после окончания последнего анализа промыть капилляр
раствором тетраборнокислого натрия молярной концентрации c(Na2B40 7 10Н2О) = 0.02 моль/дм3
(6.2.2.1) в течение 10—15 мин и оставить на ночь заполненным этим же раствором.
П р и м е ч а н и е — При работе с реальными пробами на электрофореграмме могут наблюдаться дрейф
базовой линии, появлениеступеней и смещение времен выхода компонентов, что связано с возможным мешающим
влиянием матричных компонентов или примесей. В этом случае рекомендуется по окончании работы промыть
капилляр дистиллированной водой 2 мин. раствором соляной кислоты (6.2.1.1) — 10мин. дистиллированной водой — 5
мин. гидроокисью натрия (6.2.1.2) — 10 мин, дистиллированной водей — 5 мин. буферным раствором — 5 мин и
оставить на ночь заполненным этим же раствором.
7.2.10 Градуировка системы и контроль стабильности градуировочной характеристики
Градуировку системы капиллярного электрофореза проводят методом одного эталона, анализируя
не менее трех раз градуировочный раствор триптофана (7.2.8.3).
7.2.10.1 Ввод градуировочных растворов
Предварительно необходимо промыть капилляр свежей порцией рабочего буферного раствора
(7.2.7.1) . после чего запустить и перевести в режим ожидания программу «МультиХром».
Рекомендуемые параметры ввода: давление 30 мбар. время ввода 5 с. напряжение 0 кВ.
7.2.10.2 Анализ градуировочных растворов
Рекомендуемые параметры анализа: рабочая длина волны 219 нм; напряжение плюс 20 кВ; тем
пература 40 °С; время анализа 8 мин.
Уровни жидкости в пробирках с буферным раствором на входе и выходе капилляра должны быть
одинаковыми, поэтому необходимо через 7—10 анализов пробирки на входе и выходе заново наполнять
свежими порциями буферного раствора одинакового объема.
7.2.10.3 Построение градуировочной зависимости
Электрофореграммы. полученные по 7.2.10.2. обрабатывают в соответствии с процедурой граду
ировки. описанной в руководстве пользователя программы обработки данных («МультиХром» или ана
логичной). С помощью программы рассчитывают среднюю величину градуировочного коэффициента и
среднеквадратичное отклонение (СКО) имеющейся выборки. Градуировку следует считать успешной,
если величина СКО не превышает 5 %. В противном случае градуировочный раствор анализируют еще
несколько раз. дополняя градуировочную таблицу до получения указанной величины СКО. Выбраковку
неудовлетворительных градуировочных точек проводят в том случае, если отклонение площади пика и
одновременно времени выхода лика триптофана превышает 5 % от средних значений.
Ю