ГОСТ Р ИСО 10993-5—2009
4.2.3 Условия приготовления экстракта
4.2.3.1 Приготовление экстрактов следует проводить в стерильных, химически инертных закры
тых контейнерах с соблюдением правиласептики всоответствии с ИСО 10993-12.
4.2.3.2 Рекомендуемыми условиями экстракции являются:
a) не менее 24 ч при (37 i 2)вС;
b
) (72*2)4 при (50±2) °С; c)
(24 ± 2) ч при (70
1
2)°С;
d)
(110,2)чпри(121 ±2)°С.
Рекомендуемые условия применяют в соответствии с характеристиками изделия и конкретными
условиями использования. Методы экстракции с использованием культуральной среды с сывороткой
могут применяться только при условиях, приведенныхв 4.2.3.2. перечисление а).
4.2.3.3 Если экстракт (передконтактом с клетками) фильтруют, центрифугируютили обрабатыва
юткаким-либодругим способом, это необходимо внести вокончательный отчетв соответствии с разде
лом 9. Подбор pH экстракта также заносят в отчет. Манипуляции с экстрактом, например подбор pH,
могут повлиятьна результат.
4.3Приготовление материаладля исследования методом прямого контакта
4.3.1 Материалы различных форм, размеров или физических состояний (например, жидкое или
твердое) в исследованияхна цитотоксичность изучают без изменений.
Желательно, чтобы хотябыодна из сторон твердого образца была плоской. Другие формы ифизи
ческие состояния требуютвнесения изменений в образец.
4.3.2 Следует учитыватьстерильностьобразца.
4.3.2.1 С исследуемыми материалами стерилизованных изделий обращаются с соблюдением
условий асептики в течение всего процесса исследования.
4.3.2.2 Исследуемые материалы изделий, которые выпускают нестерильными, но подвергают
стерилизации перед применением, стерилизуют методом, рекомендованным изготовителем, и приме
няютс соблюдением условий асептики в теченио всего процесса исследования.
Воздействие методовстерилизации истерилизующихагентов на изделиепринимаютво внимание
при выборе процедуры приготовления исследуемого материаладо его использования в тест-системе.
4.3.2.3 Исследуемые материалы изделий, которые могутприменяться нестерильными, использу
ют в таком виде, в каком они выпускаются, процесс приготовления экстрактов проводят с соблюдением
условий асептики в течение всего процесса исследования.
4.3.3 Жидкости исследуют:
a) прямым осаждением или
b
) осаждением на биологически инертную абсорбирующую матрицу.
П р и м е ч а н и е — Для этой цели подходят фильтровальные диски.
4.3.4 Если необходимо, материалы, являющиеся суперабсорбентами всоответствии с классифи
кацией. погружают в культуральную среду перед исследованием, чтобы избежать сорбции культураль
ной среды в сосуде, используемом для исследования.
5 Линии клеток
5.1 Обычно используют известные линии клеток из известных источников1».
5.2 Если требуется особая чувствительность, используют лишь первичные клеточные культуры,
линии клеток и культурыорганическоготипа, полученные непосредственноизживыхтканей, если можно
продемонстрировать воспроизводимость иточность ответной реакции.
5.3 Если маточная культура линии клеток сохраняется, то ее содержат при температуре минус
80 йС или ниже в соответствующей культуральной среде, содержащей вещество, защищающее от воз
действия низких температур (криопротектор), например, диметилсульфоксид или глицерол. Длитель
ное хранение (от нескольких месяцевдо многихлет)возможнотолько при температуре минус 130 °Сили
ниже.
5.4 Для исследования используютлишь клетки, не содержащие микоплазму.
Перед использованием маточные культуры исследуют надежным методом, чтобы убедиться в
отсутствии микоплазмы.
1) Например, рекомендуемыми линиями клеток являются Amencan Type Culture Collection CCL 1 (ИСТСклон
929}. CCL 163 (Balb.-ЗТЗ клон A31), CCL 171 (MRC-5) и CCL 75 (WI-38). CCL 81 (Vero) и CCL 10 ЦВНК-21 (С-13)] и V-79
379A. Эта информация приводится для удобства пользователя настоящим стандартом и не является рекламой
этой продукции со стороны ИСО. Возможно использование других линий клеток, если доказано, что они приводят к
таким же или более релевантным результатам.
3