р
(Продвижение Изменения
Л
/ 2
к
ГОСТР 52174—2003)
«8 Обработка и интерпретация результатов анализа
8.1 Результаты гибридизации регистрируют спомощью универсального аппаратно-программного ком
плекса дляанализа биочипов (УАПК) (1J. Инсталляция и эксплуатация комплексаосуществляется в соот
ветствии с руководством поэксплуатации УАПК.
8.2 Производят запуск программного обеспечения, поставляемого вместе с комплексом {файл
imageware.exe). При запуске на мониторе появляется схема биочипа с указанием отдельных ячеек и
обозначением находящихся в них зондов. Названия зондов соответствуют указанным в таблице 1 и на
рисунке 1.
8.3 Биологический микрочип после проведения гибридизации, промывки, удаления гибридизацион-
ной камеры, ополаскивания и высушивания помещают в держатель УАПК «лицевой» стороной {содержа
щей гелевые ячейки) вверх.
8.4 Нажимают пиктограмму с надписью «Пуск» в верхней части диалогового окна «Снимок». При
этом происходит возбуждение флуоресценции ячеек биочипа лазерами с длиной волны 640 нм. захват
флуоресцентного изображения, его обработка и выдача отчета о присутствии в исследуемом образце ДНК
растительного происхождения, идентификации видоспецифичнойДНК (соя. кукуруза, картофель, рис) и
наличии/отсутствии генетических элементов, используемых как детерминанты трансгенности. Применение
универсального аппаратно-программного комплекса (УАПК) для анализа биологических микрочипов [1]
позволяет автоматизировать все этапырегистрации и интерпретации результатов иполучать заключение о
наличии/отсутствии ДНК растительного происхождения в исследуемом образце, а также о наличии/отсут
ствии генетических детерминанттрансгенности.
8.5 Анализ биологических микрочипов с прогибридизованными ПЦР-лродуктами. полученными при
амплификацииДНК. выделенной из различных образцов, начинают с регистрации иинтерпретации гибри-
дизационных картин положительного (заведомотрансгеннойДНК) иотрицательного контроля (заведомо
нетрансгенной ДНК).
8.6 Результатанализа ДНК сои. содержащей трансгенные элементы, с использованием гибридиза
ции на биочипе, представлен в приложении В.
8.7 В случае, если при использовании заведомонетрансгенной ДНК регистрируют сигнал в ячейках,
содержащихолигонуклеотиды, комплементарные последовательностям фрагментов векторных конструк
ций и маркерных генов, это свидетельствует о получении ложноположительного результата. При этом
результаты анализа остальныхисследуемых образцов неучитываются. Причиной может бытьзагрязнение
(контаминация) ГМИ реактивов и/или оборудования. Вэтом случае необходимо обработать поверхности
лабораторных столов иоборудования раствором соляной кислоты по ГОСТ 3118 (0.1 моль/дм3), заменить
реактивы насвежеприготовленные и повторить анализ. Вслучаеотсутствиясигналов в ячейках, содержа
щих зонды, специфичные к различным генетическимдетерминантам трансгенности. при использовании
заведомо нетрансгенной ДНК. делают заключение об отсутствии контаминации ипроводят анализобраз
цовДНК согласно протоколу.
8.8 Отсутствие флуоресцентныхсигналовв ячейках, содержащих олигонуклеотиды, специфичные к
гену RBCL. при использовании нетрансгенной растительной ДНКсвидетельствует о получении ложноотри
цательногорезультата. Приэтом результаты анализа остальных исследуемыхобразцов не учитываются.
Причиной могут бытьпотеря активности одного из компонентов реакционной смесидля амПЦР или несоб
людение условий проведения амПЦР и/или гибридизации на биологическом микрочипе. В этом случае
необходимо заменить реактивы насвежеприготовленные иповторить анализ. Наличие сигнала в ячейках,
содержащих олигонуклеотиды, специфичные к ДНК растительного происхождения, при использовании
заведомо нетрансгенной ДНК. свидетельствует об эффективно проведенной амПЦР и гибридизации на
биочипе. При этом анализ образцовДНК проводят далее согласно протоколу».
Приложение Бизложить в новой редакции:
7