(Продолжение Изменения No2
к
ГОСТР 52174—2003)
Биологический микрочип представляет собой пластиковуюподложку, выполненнуюв формате пред
метного стекла по ГОСТ 9284, на поверхности которой в определенном порядке расположена 31 ячейка
полиакриламидного геля в форме полусферы диаметром 100 мкм (обозначены кружками на рисунке 1). 22
из нихсодержат индивидуальный ковалентно иммобилизованный олигонуклеотид (переченьи назначе ние
олигонуклеотидов приведены в таблице 1). Пять ячеек с индексом «0» не содержат перечисленных
индивидуальныхковалентно иммобилизованных олигонуклеотидов и выполняют рольотрицательного кон
троля гибридизации. Четыре ячейки с индексом «М», содержат ковалентно связанный флуоресцентный
краситель ипредназначены для автоматического вычисления интенсивностифлуоресценции ячеек биоло
гического микрочипа после гибридизации. Поверхностьбиологического микрочипа должна бытьзакрыта
специальной составной крышкой с отверстиями, которая вместе с подложкой образует гибридизационную
камеру, предназначеннуюдля проведения реакции гибридизации анализируемых ПЦР-продуктовс иммо
билизованными набиологическом микрочипе олигонуклеотидами, иисключающую возможность испаре
ния реакционнойсмеси в процессе гибридизации. Диагностическая специфичность приидентификации ра
стительнойДНК сои, картофеля, кукурузы, риса составляет неменее 95 %.
Допускается применениедругихсредств измерений с метрологическими характеристиками, а также
оборудования и реактивов с техническими характеристиками не хуже указанных выше».
Пункт 6.1.2. Заменить слова: «186,12 г/дм3»на «74.4 г/дм3», «18,61 г» на «7.44 г», «гидроокиси на
трия» на «NaOH».
Пункты 6.1.4—6.1.9 изложить в новой редакции:
«6.1.4 Приготовление раствора Трис-HCI массовой концентрации 242.2 г/дм3
В колбу вместимостью 100см3помещают24.22 г трис(оксиметил)аминометана по4.25 (10] и раство
ряют приблизительно в 80 см3особо чистой стерильной воды. Концентрированной соляной кислотой по
ГОСТ 3118доводят pH растворадо 7.5 ед. pH. а объем — до 100см3особо чистой стерильной водой.
Срок хранения при комнатной температуре— не более 6 мес.
6.1.5 Приготовление раствора NaCI массовой концентрации 146,2г/дм3
В плоскодонную колбу вместимостью 100 см3 помещают 14,62 г хлористого натрия по ГОСТ 4233,
растворяютв 70—80 см3особочистой стерильной воды, затем полученный раствор переносят в мерную
колбу вместимостью 100 см3и особо чистой стерильной водойдоводят объем раствора до метки.
Срок хранения при комнатной температуре— не более одного года.
6.1.6 Приготовление ЦТАБ-буфера
В стеклянную колбу вместимостью 100 см3помещают2.0 гсухого цетилтриметиламмония бромида
по 4.28 (11), далее добавляют 5см3 раствора Трис-HCI. приготовленного по 6.1.4.56 см3раствора NaCI,
приготовленного по6.1.5. и 10см3раствора ЭДТА, приготовленногопо 6.1.2. Объем растворадоводятдо
100 см3особочистой стерильной водой. Перемешивают намагнитной мешалкедо полного растворения
соли.
Срок хранения при комнатной температуре — не более одного года.
6.1.7 Приготовление ЦТАБ-раствора
В стеклянную колбу вместимостью 100 см3помещают0.5 г сухого цетилтриметиламмония бромида
по 4.28 [11], идобавляют 1.6 см3раствора NaCI. приготовленного по 6.1.5. Объем раствора доводят до
100 см3особочистой стерильной водой.
Срок хранения при температуре 4 °С — 5 °С — не более месяца, в морозильной камере по ГОСТ
26678 при температуре минус 20 °С— до одного года.
6.1.8 Приготовление разведенного раствора NaCI
В мерную колбу вместимостью 100 см3вносят 48 см3раствора NaCI. приготовленного по 6.1.5, и
особочистой стерильной водойдоводятобъем растворадо метки.
Срок хранения при комнатной температуре— не более 6 мес.
6.1.9 Раствор Taq-полимеразы по4.31 хранят при температуре минус20 °Сне более шести месяцев.
Недопускается хранение раствора Taq-полимеразы ниже температуры минус23 °С».
Пункты 6.2.1—6.2.6 изложить в новой редакции:
«6.2.1 Две параллельные пробы анализируемого продукта массой около 100 мг каждая помещают в
две чистые стерильные микроцентрифужные пробирки по 4.15 вместимостью 1,5 см3, добавляют по
500 мм3 ЦТАБ-буфера. приготовленного по6.1.6. перемешивают нааппаратедля встряхивания по4.10[6] в
течение 2мин и выдерживают 15—20 мин при температуре 65 °С в термостате для микропробирок.
4