т е г Р 52174-2003
7.2.3После окончания гибридизации пластиковые крышки снимают, каждый биологический
микрочип трижды промывают дистиллированной водой по ГОСТ 6709 при температуре 25 *С и
высушивают при комнатной температуре.
Схема метода идентификации генетически модифицированных источников (ГМИ) раститель
ного происхождения приведена в приложении Б.
8 Обработка результатов анализа
8.1 Визуализацию гибриднзацнонной картины на биологическом микрочипе для анализируе
мой пробы осуществляют с помощью аппаратно-программного комплекса для анализа флуоресцен
ции биологических микрочипов «Чнпдетектор-03* |2| и компьютерной программы »Imageware» |1|
или «Био-1* |23|.
(Поправка).
8.2 Полученную на экране компьютера гибридизацнонную картину для анализируемой пробы
сравнивают с гнбрндизационной картиной для положительного контроля (заведомо трансгенной
ДНК) и гибриднзацнонной картиной для отрицательного контроля (заведомо нетрансгенной ДНК).
Пример гибридизационыой картины флуоресцентных продуктов амПЦР в гелевых ячейках биоло
гического микрочипа приведен в приложении В. Наличие высокого уровня специфического флуоре
сцентного сигнала в гелевых ячейках биологического микрочипа, содержащих иммобилизациоиные
олигонуклеотиды (для промоторов 35S и nos, терминатора ocs, генов gus или nptll), свидетельствует о
присутствии конкретных чужеродных последовательностей ДНК в анализируемой пробе, т. е. о
трансгенности анализируемой ДНК. Низкий уровень флуоресцентных сигналов в гелевых ячейках
биологического микрочипа после гибридизации, сравнимый с уровнем фоновой флуоресценции
отрицательного контроля, по не выше установленного порога чувствительности в программе
Imageware, указывает на отсутствие конкретных чужеродных последовательностей ДНК в анализи
руемой пробе, т. е. о нетрансгенности анализируемой ДНК.
8.3 Интерпретация результатов
8.3.1 Высокий уровень флуоресценции одной, нескольких или всех пяти гелевых ячеек
биологического микрочипа, содержащих иммобилизованные олигонуклеотиды, превышающий за
данный в программе Imageware |1| порог чувствительности, свидетельствует о наличии генетически
модифицированных источников (ГМИ) в анализируемом продукте.
8.3.2 Низкий уровень флуоресценции всех пяти гелевых ячеек биологического микрочипа,
содержащих иммобилизованные олигонуклеотиды, близкий к фоновой флуоресценции отрицатель
ных контролей и не достигающий заданного в программе «Imageware» порога чувствительности,
свидетельствуетоб отсутствии генетически модифицированных источников (ГМИ) ванализируемом
продукте.
8.3.3 Высокий уровень флуоресценции гелевых ячеек при использовании заведомо нетранс
генной ДНК свидетельствует о получении ложноположительного результата. Причиной может быть
загрязнение ГМИ реактивов и/или оборудования. Вэтомслучае необходимо обработать поверхности
лабораторных столов и оборудования раствором соляной кислоты (1 моль/дм1), заменить реактивы
на свежеприготовленные и повторить анализ. Полученный при повторном анализе низкий уровень
флуоресценции гелевых ячеек при использовании заведомо нетрансгенной ДНК свидетельствует
о достоверном результате, который яатяется окончательным.
8.3.4 Низкий уровень (отсутствие) флуоресцентного сигнала при использовании заведомо
трансгенной ДНК свидетельствует о получении ложноотрииательного результата. Причиной могут
быть потеря активности одного из компонентов реакционной смеси для амПЦР или несоблюдение
условий проведения амПЦР и/или гибридизации на биологическом микрочипе. В этом случае
необходимо заменить реактивы на свежеприготовленные и повторить анализ. Полученный при
повторном анализе высокий уровень флуоресценции гелевых ячеек при использовании заведомо
трансгенной ДНК свидетельствует о достоверном результате, который является окончательным.
9 Требования безопасности
9.1 При выполнении всех работ необходимо соблюдать требования техники безопасности при
работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.007.
9.2 Помещение, в котором проводятся работы, должно быть оборудовано обшей приточно
вытяжной вентиляцией по ГОСТ 12.4.021. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не
должно превышать норм, установленных ГОСТ 12.1.005.
9.3 При работе с электроустановками электробезопаспость должна соответствовать требова
ниям ГОСТ 12.1.019. Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной
безопасности ГОСТ 12.1.004 и быть оснащено средствами пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.
8