(Продолжение Изменения № 2
к
ГОСТР 52174—2003)
7.1.2 Реакционные смеси дляамПЦР «М1» и «М2», полученные по6.3.1.1—€.3.1.2. микродозатором
вносят в микроцентрифужные пробирки по20 мм3в каждую таким образом, чтобы смесь «М1» была рас
пределена по пробиркам с индексом «N,». а смесь «М2» — по пробиркам с индексом «N2».
7.1.3 Анализируемую ДНК пробы N. выделенную по 6.2, вносят микродозатором по 5 мм3в микро
центрифужные пробирки среакционной смесью для амПЦР по7.1.2, маркированные, соответственно. «N,» и
«N2». При использовании амплификатораДНК [2] без подогрева крышки в каждую микроцентрифужмую
пробирку с реакционной смесью вносят по 30 мм3 вазелинового масла поГОСТ 3164для предохранения
реакционной смеси от испарения водной фазы при амПЦР. В этом случае анализируемуюДНК вносят под
слой масла, в результате чего образуются водная имасляная фазы.
7.1.4 Вдведругие микроцентрифужные пробирки микродозатором вносят по5 мм3растворазаведо
мо трансгенной ДНК (положительный контроль).
7.1.5 Затем еще вдведругие микроцентрифужные пробирки микродозатором вносят по5 мм3 раство
ра заведомо нетрансгенной ДНК(отрицательный контроль).
7.1.6 Все микроцентрифужные пробирки со смесями, подготовленными по 7.1.3—7.1.5. помещают в
амплификаторДНК ипроводят амПЦР попрограмме, указанной в таблице 2.
Т а б л и ц а 2 — Программа проведения амПЦР
Шаг программы
Температура. ’С
Время инкубации
Число циклов
1
9 5
12
МИН
1
2
95
3 0 С
55
51
30
С
72
30 с
3
72
10 м и н
1
Подраздел 7.2 изложить в новой редакции:
«7.2 Гибридизация на биологическом микрочипе
7.2.1Для проведения этапа гибридизации готовят N+2 микроцентрифужные пробирки вместимостью
0.5 или 1.5 см3(N — количество анализируемых проб, две другие пробирки нужны для анализа положи
тельногои отрицательного контроля).
7.2.2 В необходимое количество микроцентрифужных пробирок микродозатором вносят по 18 мм3
гибридизационного буфера 4.33 (13]. К гибридизационному буферу в пробирку «N» добавляют по9 мм3
водной фазы ПЦР-смесей из пробирок «N,» и «N2», полученных в результате проведения амПЦР по 7.1.6
и перемешивают в течение 20—30 с на аппаратедля встряхивания по4.10счастотой вращения неменее
1500 мин-’ для получения гибридизационной смеси.
7.2.3 Из каждой микроцентрифужной пробирки микродозатором отбираютпо 34 мм3гибридизацион
ной смеси (для каждого биологического микрочипа), полученной по 7.2.2. Смесь вносят через любое из
двух отверстий гибридизационной камеры, послечегооба отверстия закрывают крышкой. Гибридизацию
проводят в термостатепо4.4 [3] при температуре 37 °С. Минимальное время гибридизации составляет 3ч.
Допускается гибридизация втечение ночи, но не более 16—18 ч.
7.2.4 После окончания гибридизации крышку реакционной камеры открываюти микродозатором отби
рают гибридизационную смесь из камеры микрочипа. В любое из двух отверстий камеры вносят 34 мм3
дистиллированной воды по ГОСТ 6709. предварительнопрогретойдо температуры 37 °С. Воду выдержи
вают в реакционной камере биологического микрочипа в течение 1минуты, затем отбирают. Процедуру
повторяют, после чегосоставную крышкуотсоединяютот подложки. Подложку последовательно промы
вают дистиллированной водой по ГОСТ 6709. этиловым спиртом по 4.26. дистиллированной водой по
ГОСТ 6709 ивысушивают при комнатной температуре.
Схемаметодаидентификации генетически модифицированныхисточников (ГМИ) растительного про
исхождения приведена вприложении Б».
Раздел 8 изложить в новой редакции:
6