ГОСТ Р 52995—2008
4 Сущность метода
Молочныебелки, присутствующие виспытуемойпробе, выборочноудаляютс применением тетра-
боратного буфера EDTAдля обнаружения малых количествдобавленного растительного белка. В при
сутствии додецил сульфата натрия добавляют буфер три-HCI и восстановливают для растворения
осадка, чтобы диссоциировать белки и разрушить любые белковые агрегаты, образованные связями S-
S. Белки разделяются и определяются капиллярным электрофорезом. Число растительных белков
определяют количественно по предшествующей калибровке.
5 Реактивы
Если не установлено иначе, то применяют реактивы только признанного аналитического качества
и водудвойнойдистилляции или деминерализованную либо воду эквивалентной чистоты.
5.1 Экстрагирующий буфер
Растворяют 1,14 г десятиводного тетрабората натрия(Na2B40 7■ЮН20) и 1.49 г дигидрата натрие
вой соли этилен-диаминтетрауксусной кислоты (EDTA; C10HuN2Na2Ofl . 2Н2<Э) в мерном цилиндре
(см. 5.1) в80 см3воды. Разбавляют водойдо 100 см3и перемешивают.
Проверяют, равен ли pH экстрагирующего буфера раствора 8.3 ±0,1. Если конечное значение pH
выходит за этот интервал, повторяют приготовление экстрагирующего буфера, при этом заменяют все
реактивы. Корректировка pH с помощью химическихреактивов не допускается.
5.2 Буфер для образца
Растворяют 606 мг три(гидроксиметил)аминометана (C4H1lNOJ), 1,00 г соли додецилсульфата
натрия, (SDS; C,2H.,04SNa) и 37 мг EDTA (C10H14N2Na2Oa 2Н20) в мерном цилиндре в 80 см3воды и
перемешивают. Добавляют 14.7 см3соляной кислоты, имеющей концентрацию с (HCI) = 0,1 моль/дм3и
2 см32-меркаптоэталона. Разбавляютводойдо 100 см3и перемешивают.
Проверяют, равенли pH буферадля образца 8,7 ±0.1. Если конечноезначение pH выходитзаэтот
интервал, повторяют приготовление экстрагирующего буфера, при этом заменяют все реактивы. Кор
ректировка pH с помощью химических реактивов недопускается.
5.3 Электрофорезный буфер, например Beckman eCAP™SDS 14-200 гелевый буфер или эквива
лентный.
5.4 Раствор гидроокиси натрия (едкого натра), с (NaOH) =0,1 моль/дм3.
5.5 Эталонная смесь для испытания, содержащая белки, имеющие молекулярную массу от 10
до 200.
П р и м е ч а н и е — В качестве эталонной смеси можно использовать смесь, имеющуюся в продаже.
5.6 Эталонный образец для калибровки с известным процентным содержанием растительного
белка, которое поставляется NIZO (Ede, NL). Белковый состав калибрующего образцадолжен бытьтак
же известен.
6 Аппаратура
6.1 Градуированный мерный цилиндр вместимостью до 100 см3.
6.2 Пипетка Пастера.
6.3 Микрососуд с завинчивающейся крышкой вместимостью 1.5 см3.
6.4 Лабораторные весы с точностью взвешиваниядо 0,1 мг.
6.5 Центрифуга, имеющая вращение с радиальным ускорением до 6500 д.
6.6 Измеритель pH. имеющий минимальную чувствительность 0.1 единицы pH. а также стеклян
ный электрод и соответствующий эталонный электрод стемпературной компенсацией.
6.7 Вихревая мешалка (вортекс).
6.8 Термомиксер, Eppendorf 5436 или аналогичный прибор.
6.9 Прибор капиллярного электрофореза слинейным градиентом напряжения.
6.9.1 Колонка, капиллярс гидрофильным покрытием изкварцевогостекла, рабочаядлина которо
госоставляетоколо 20 см (от инжекторадодетектора), имеющий внутреннийдиаметр 75 мкм.
6.9.2 UVдетектор, способный проводить измерения приблизительно на 214 нм.
6.9.3 Программа, имеющая способность высчитать контрольное значение из серии опытов на
образцах.
6.10 Системаданных, выдающая необходимую информацию.
2