ГОСТ Р 52842—2007
Результатыоцениваютс использованиемстандартныхстатистическихметодоврасчетаповторяе
мости. При применении стандартных коммерческих наборов на основе микропланшетдля стандартов и
образцов используют, как минимум, двойные повторности (дубли).
4.1.5.2 Оценка экспериментальныхданных
Под пределом обнаружения обычно понимается концентрация, при которой показатель результа
та анализа образца достоверно отличается от показателя результата отрицательного контрольного
образца. Для статистической оценки исключительно важно иметь установленный приемлемый довери
тельный интервал метода в ходе исследования. Общепринятым минимальным доверительным интер
валом является уровень достоверности 95 %. Тем не менее, для достижениядаже этого минимального
уровня достоверности необходимо провести тщательный анализ достаточно большого числа повтор
ностей для каждой концентрации. В зависимости от предполагаемой цели анализа допус
к
ается
использовать иболее практичный подход.
В качественном методе показатель результата обычно сравнивают с точкой скрининга, получен
ной при испытанияхотрицательныхилиположительныхконтрольныхобразцов. Точкискрининга (напри
мер. пороговая величина или контрольный стандарт/отметка) могут быть даны изготовителем
тестового набора или представлены
к
а
к
внутренний
к
онтрольный те с т или внешний контрольный
калибратор. Они или рассчитываются, или выполнены таким образом, чтобы отрицательный результат
отличалсяот положительногонеменеечем надва ил итри стандартныхотклонения. Сэтой цельюпроиз
водители тестовых наборов иногда предоставляютдля испытаний отрицательные или положительные
контрольныеобразцы, содержащиеопределенноеколичествоаналита(ов).определяемого(ых)данным
методом. Как правило, выбирают концентрацию, соответствующую регламентируемой величине
(например, ПДК). Используя контрольные образцы, показатель результата образца сравниваютс поро
говой величиной или контрольным значением и определяют, содержит ли анализируемый образец кон
центрацию. аналогичную или превышающую содержащуюся в положительном контрольном образце.
Для анализаданныхкачественногометода рекомендуетсяпредставление результатов в виде гра
фика, где наосиX нанесены концентрации определяемоговещества, а пооси Y — процент положитель
ных результатов (кривая концентрация/показатель). Выбор линейной или логарифмической размер
ности шкалы X зависит от интервала исследуемых концентраций.
Л
огарифмическая шкала более пред
почтительна. если кратность интервала более 100.
Для количественного метода выстраиваетсястандартная кривая, с помощью которойопределяют
концентрацию аналита в образце, где ось X представляет собой шкалу концентрации определяемого
вещества, ось Y — шкалусоответствующихданных, например, оптической плотности, флюоресценции
илирадиоактивности. Выборлинейнойилилогарифмической размерности шкалыX зависитотинтерва
ла исследуемыхконцентраций.
Л
огарифмическая шкала более предпочтительна, есликратностьинтер
вала более 100. В этом случае строится полулогарифмическая кривая. Полулогарифмическая кривая
иммунологическогометодаимеет, какправило, сигмовиднуюформуй неможетбытьописаналинейным
уравнением. Несмотря на существование множества математических методов, пригодных для описа
ния калибровочных кривых иммунологических методов, для иммуноферментного метода, например,
общепринятым является использование четырехкомпонентной логистической модели и метода наи
меньшихквадратов. Оба методадаютсравнительно близкиерезультаты и поменьшей мере один из них
включен в большинство программ обработкиданных иммунологическихметодов.
В количественном методе точность оценки в значительной мере определяется расположением
обнаруженной величины оптической плотности (флюоресценции или радиоактивности) на калибровоч
ной кривой. Интервал измерения калибровочного графика соответствует максимально приближенной к
линии части сигмовидной кривой (если концентрация выстроена пологарифмической шкале).
4.2Экспериментальные параметры
4.2.1 Процент ложноположительных и ложноотрицательных результатов
В зависимости от области применения исследуемого качественного метода может бытьдостаточ
ноопределениявероятностиложноположительных иложноотрицательныхрезультатов. Исследование
вероятности ложноположительных результатов включает n-кратное исследование «отрицательного
молока» (см. 4.1.1) или других отрицательных образцов, соответствующих предполагаемой области
примененияметода. Числоисследованийта
к
же зависитот предполагаемой области применения мето
да. Например, для определения показателя 90 % отрицательных результатов с вероятностью 95 %
необходимо проанализировать не менее 60образцов.
Вероятностьложноотрицательных результатов можетбытьполученас помощью кривой содержа-
ние/сигнал для ряда исследуемых концентраций. Если требуется определить достоверность, оценку
проводят согласно процедуре, приведеннойдля оценки ложноположительных результатовприопреде
ленной концентрации (например, предел обнаружения или ПДК).
5