ГОСТ Р 52426—2005
Приложение В
(обязательное)
Методики приготовления культуральных сред и реактивов
В.1 Лактозиый TTX агар с гептадецилсульфатом натрия (среда с тераитолом 7)
В.1.1 Базовая среда
Состав:
лактоза — 20 г;
пептон — Юг:
дрожжевой экстракт — 6 г;
мясной экстракт — 5г.
бромтимоловый синий — 0.05 г;
агар (в форме порошка или хлопьев) — 15—20 г.
дистиллированная вода — 1000 мл.
Примечание — Массуагара выбирают в зависимости от егосвойств кгелеобразова-
нию.
Растворяют все указанные ингредиенты в дистиллированной воде при нагревании.
Устанавливают значение pH таким образом, чтобы после стерилизации оно было равно
(7.2 ±0.1) при 25 *С.
Разливают полученную среду в емкости вместимостью не более 250 мл и стерилизуют в
течение 15 мин при (121 ± 3) °С.
В.1.2 Раствор 2.3.5-трифенилтетразолиум хлорида (ТТХ)
Состав:
2.3.5-трифенилтетразолиум хлорид (ТТХ) — 0.05 г:
дистиллированная вода — 100 мл.
Растворяют ТТХ в небольшом количестве дистиллированной воды и доводят объем
дистиллированной водой до 100 мл. Стерилизуют раствор фильтрацией через мембрану с
номинальным размером пор 0.2 мкм.
В.1.3 Раствор гептадецилсульфата натрия
Состав:
гептадецилсульфат натрия (тергитол 7) — 0.2 г;
дистиллированная вода — 100 мл.
Растворяют гептадецилсульфатнатрия (тергитол 7) в небольшом количестведистилли
рованной воды и доводят объем дистиллированной водой до 100 мл. Раствор стерилизуют в
течение 15 мин при (121 г 3) *С.
В.1.4 Среда полного состава
Состав:
базовая среда (поВ.1.1)— 100 мл.
раствор ТТХ (по В.1.2) — 5 мл;
раствор гептадецилсульфата натрия (по В.1.3) — 5 мл.
Расплавляют базовую среду (по В.1.1) и охлаждают до (50 ± 5) *С. Соблюдая стериль
ность,добавляютв колбу сохлажденной базовой средой растворы ТТХ (no В.1.2)игептаде
цилсульфата натрия (по В.1.3). тщательно перемешивают, избегая образования пузырей,
затем разливают в чашки Петрис образованием слоя толщиной не менее 5 мм. Полученную
среду хранят в защищенном от света месте при (5 ± 3) ’’С не более 10 сут.
11
916