ГОСТ 30726-2001
7.2 Для подтверждения принадлежности микроорганизмов, выросших в жидких средах, к E.coli
делают пересевы по ГОСТ 26670 на поверхность среды Эндо, приготовленной по 6.2.12.
Посевы инкубируют при температуре (36±1) *С в течение (24±3) ч.
7.3 Посевы на агаризованной среде по 7.1 и 7.2 просматривают после инкубирования и отмечают
рост характерных для E.coli колоний.
На среде Эндо E.coli образуют колонии от бледно-розового до темно-красного цвета часто с
металлическим блеском.
Для дальнейшего подтверждения принадлежности выросших колоний к E.coli отбирают по три
колонии каждого типа.
Из отобранных колоний приготавливают мазки, окрашивают их по [раму по ГОСТ 30425. Парал
лельно в каждой отобранной колонии убактерий по ГОСТ 29184 определяют отсутствие оксидазы.
Оксидазоотрицательные бактерии пересевают на поверхность мясо-пептонного агара или среды,
приготовленной из сухого питательного агара. Посевы инкубируют до появления видимого роста при
температуре (36±1) "С.
7.4 Уоксидазоотрицательных грамотрицателышх культур (наточки размером 1,1+1,5x2+6 мкм),
выросших в пересевах по 7.3. определяют возможность образования индола, ацетонна, сероводорода,
утилизации цитрата, интенсивность ферментации углеводов с образованием кислоты, ферментацию
сорбита, глюкозы и лактозы.
7.4.1 Определениеобразования индола
Культуру высевают в пробирку с бульоном Хоттингера, приготовленным по 6.2.5, или мясо-
пептонным бульоном с триптофаном, приготовленным по 6.2.4. Пол пробку в пробирку помешают
полоску индикаторной бумажки, приготовленной по 6.1.4. Посевы инкубируют при температуре
(36±1) ’С в течение 24 ч. Если за время инкубирования посевов в среде накапливается индол, то
желтый цвет индикаторной бумажки меняется на цвет от сиренево-розового до интенсивного
малинового.
Образование индола можно определить с помощью реактивов Эрлиха и Ковача, приготовленных
по 6.1.2. Для этого к 5 см’ 24-часовой культуры добавляют I см*
одного из
реактивов. Образование
красного слоя на поверхности культуральной жидкости указывает на положительную реакцию.
E.coli образует индол.
7.4.2 Определение образования анеточна (реакция Фогес-Проскауэра)
Культуру высевают в пробирки со средой Кларка, приготовленной по 6.2.7. Посевы инкубируют
при температуре (36±1) *С втечение 4S ч.
После инкубирования посевов к I см3отобранной культуральной жидкости прибавляют 0.6 см5
раствора а-нафтола, приготовленного по 6.1.3, и 0.2 см5раствора гидроокиси калия, приготовленного
по 6.1.5. После прибавления каждого реактива пробирку встряхивают. Появление розового окрашива
ния через 15—60 мин указывает на положительную реакцию.
E.coli не образует ацетоин.
7.4.3 Определениеутилизации цитрата
Культуру высевают в пробирки со средой Козера, приготовленной по 6.2.9. или на поверхность
среды Симмонса, приготовленной по 6.2.10. Посевы инкубируют при температуре (36±1) ’С втечение
24 - 48 ч. Изменение оливково-зеленого цвета сред на васильковый, синий указывает на положитель
ную реакцию.
E.coli не утилизирует цитрат.
7.4.4 Определение интенсивности ферментации углеводов с образованием кислоты (реакция с
метил-рот)
Культуру высевают в пробирки с глюкозо-фосфатным бульоном или средой Кларка или исполь
зуют посевы после отбора 1см* культуральной жидкости по 7.4.2. Посевы инкубируют при температу
ре (36±1) *С в течение 48 ч. К 5 см* культуральной жидкостиприбавляют 5—10 капель реактива
Кларка, приготовленного по 6.1.1. Появление через 1 мин красного цвета культуральной жидкости
указывает на ферментацию углеводов до pH ниже 5,0.
E.coli интенсивно ферментирует углеводы (реакция с метил-рот положительная).
7.4.5 Определение ферментации сорбита, глюкозы илактозы
Культуру высевают в среды Гисеа с сорбитом или глюкозой, или лактозой приготовленные по
6.2.11. Посевы инкубируют при температуре (36± 1) ’С втечение 24 ч, а на среде Гисса с лактозой при
температуре (44±1) *С в течение 24 ч.
4108