ГОСТ Р 70150—2022
верки реагентов, предназначенных для проведения реакции ОТ или ОТ-ПЦР), полученных после про
ведения ПЦР соответствующих аликвот реагентов (после завершения процедур транспортировки или
замораживания/оттаивания) и контрольной аликвоты.
Расчет коэффициента вариации значений Ct (V), %, проводят по формуле
у = £.100%,
(
2
)
где х — среднее арифметическое полученных результатов Ct;
8— среднеквадратическое отклонение:
п
5
(
3
)
где п — количество значений Ct, полученных в испытании (для оценки стабильности с учетом повторов
п = 6).
5.2.8Тест-систему (набор реагентов) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов
ПЦР в режиме реального времени считают устойчивой к процессу транспортирования, а также к много
кратному замораживанию и оттаиванию, если значение коэффициента вариации не превышает 10 %.
5.3 Оценка аналитической специфичности тест-системы
5.3.1 Для подтверждения соответствия тест-системы (набора реагентов) заявленным характери
стикам специфичности проводят лабораторные испытания с использованием контрольной панели об
разцов.
Из каждого образца контрольной панели проводят экстракцию ДНК/РНК и ПЦР (ОТ-ПЦР) согласно
инструкции по применению тест-системы (набора реагентов) в двух повторностях.
5.3.2 Испытания проводят двукратно, в разные дни, разными исполнителями, на разных прибо
рах. Оценку характеристик специфичности проводят по результатам испытаний.
5.3.3 Оценку специфичности ПЦР для наборов с электрофоретической детекцией продуктов ПЦР
осуществляют визуально, на основании соответствия размера фрагмента, полученного после ампли
фикации, а также отсутствия неспецифических фрагментов на электрофореграмме. Соответствие раз
мера амплифицируемого фрагмента определяют с помощью маркера молекулярных масс ДНК.
5.3.4 Если результатом испытания является отсутствие на электрофореграмме продуктов ампли
фикации для образцов панели, не содержащих целевые фрагменты ДНК/РНК, и наличие продуктов
амплификации соответствующего размера для образцов панели, содержащих целевые фрагменты
ДНК/РНК, специфичность тест-системы (набора реагентов) считают 100 %-ной для данной панели
об разцов.
5.3.5 Оценку специфичности ПЦР тест-систем с гибридизационно-флуоресцентной детекцией
продуктов ПЦР в режиме реального времени осуществляют на основании наличия или отсутствия зна
чений Ct для образцов контрольной панели.
5.3.6 Для тест-систем с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов ПЦР в режиме
реального времени должны отсутствовать значения Ct (по каналам, определяющим амплификацию
целевой ДНК) для образцов контрольной панели, не содержащих целевые фрагменты ДНК, и присут
ствовать соответствующие значения Ct для образцов, содержащих целевые фрагменты ДНК.
5.4Оценка аналитической чувствительности тест-системы
5.4.1 Для подтверждения соответствия тест-системы (набора реагентов) заявленным характе
ристикам чувствительности проводят лабораторные испытания тест-системы с использованием кон
трольной панели образцов согласно параметрам, указанным в инструкции по применению.
Из каждого образца контрольной панели проводят экстракцию ДНК/РНК в двух повторах. Каждый
полученный повтор амплифицируют в двух повторах.
5.4.2 Испытания проводят двукратно, в разные дни, разными исполнителями, на разных прибо
рах. Оценку характеристик чувствительности проводят по результатам испытаний.
5.4.3 Оценку чувствительности ПЦР для тест-систем (наборов реагентов) с электрофоретической
детекцией продуктов ПЦР осуществляют визуально, на основании наличия или отсутствия полученного
амплифицируемого фрагмента для образцов контрольной панели с разной концентрацией ДНК/РНК.
7