ГОСТ Р 70150—2022
5.4.4 Оценку чувствительности тест-систем (наборов реагентов) с гибридизационно-флуорес-
центной детекцией продуктов ПЦР в режиме реального времени осуществляют на основании наличия
или отсутствия значений Ct для образцов контрольной панели с разной концентрацией ДНК/РНК.
5.4.5 Для тест-систем с электрофоретической и гибридизационно-флуоресцентной детекцией
продуктов амплификации положительными должны быть все повторы, содержащие целевые фрагмен ты
ДНК в концентрации, превышающей или равной заявленной чувствительности тест-системы.
5.4.6 Чувствительность тест-системы (набора реагентов) считают соответствующей заявленным
характеристикам при получении положительных результатов ПЦР для всех повторов контрольных об
разцов с концентрацией, соответствующей заявленной.
5.5Оценка сходимости и воспроизводимости результатов
5.5.1 Для оценки сходимости результатов проводят серию испытаний амплификации контроль
ных образцов, входящих в комплект анализируемой тест-системы. Для проверки сходимости проводят
ПЦР одним оператором, на одном приборе, в один день отрицательного контрольного образца и поло
жительного контрольного образца в 10 повторах.
При испытаниях тест-систем (наборов реагентов) для выявления РНК возбудителей для оценки
сходимости используют дополнительный контрольный образец, содержащий целевую РНК. 10 повто
ров образца используют в постановке ОТ-ПЦР вместе с контрольными образцами, входящими в состав
тест-системы.
5.5.2 Оценку сходимости результатов ПЦР для наборов с электрофоретической детекцией про
дуктов ПЦР осуществляют визуально, на основании соответствия размера и яркости полученного ам-
плифицируемого фрагмента, а также отсутствия неспецифических фрагментов на электрофореграмме.
Результаты считают сходимыми, если после постановки ПЦР для всех повторов положительного
контроля, а также образца, содержащего целевую РНК (если применимо), на электрофореграмме на
блюдаются четкие фрагменты ожидаемого размера.
Оценку сходимости результатов ПЦР для наборов с гибридизационно-флуоресцентной детекцией
продуктов ПЦР в режиме реального времени осуществляют на основании расчета коэффициента вари
ации значений Ct (\/) для положительного контроля (образца, содержащего целевую РНК) по формулам
(2), (3), где л = 10.
Результаты считают сходимыми, если коэффициент вариации (V) не превышает 5 %.
5.5.3 Воспроизводимость результатов оценивают по результатам амплификации положительного
контрольного образца. Амплификацию отрицательного контрольного образца и положительного кон
трольного образца в 10 повторах осуществляют двумя операторами на разных приборах в разные дни.
5.5.4 Оценку воспроизводимости результатов ПЦР для наборов с электрофоретической детек
цией продуктов ПЦР осуществляют визуально, на основании соответствия размера и яркости полу
ченного амплифицируемого фрагмента, а также отсутствия неспецифических фрагментов на электро
фореграмме.
5.5.5 Оценку воспроизводимости результатов ПЦР для наборов с гибридизационно-флуоресцент
ной детекцией продуктов ПЦР в режиме реального времени осуществляют на основании расчета коэф
фициента вариации значений Ct (V).
Расчет проводят по формулам (2), (3), где п = 10.
Результаты считают воспроизводимыми, если коэффициент вариации (У) не превышает 10 %.
8