ГОСТ Р 70150—2022
5.1.3Проверку соответствия объема каждого компонента заявленному количеству исследований
проводят с использованием аттестованных средств измерений.
5.2 Оценка стабильности тест-системы (набора реагентов)
5.2.1 Тест-систему (набор реагентов) для амплификации проверяют:
- на устойчивость к температурному режиму транспортирования;
- устойчивость к многократному замораживанию и оттаиванию (при наличии компонентов, храня
щихся при температуре не выше минус 16 °С, если предусмотрено их размораживание перед работой
и/или не даны специальные рекомендации по работе с данными компонентами (например, аликвоти-
рование перед началом работ)).
5.2.2 При проведении испытаний стабильности набор делят на три аликвоты, одна из которых
является контрольной. Две другие используют для проверки стабильности. Контрольную аликвоту на
бора выдерживают при температурах хранения, указанных в инструкции по применению. Результаты
амплификации контрольных образцов контрольной аликвоты сравнивают с результатами других алик
вот после соответствующих испытаний стабильности.
5.2.3 Устойчивость к многократному замораживанию и оттаиванию тест-системы (набора реаген
тов) оценивают по результатам амплификации положительных контролей, входящих в состав набора
после нескольких циклов замораживания и оттаивания каждого компонента из аликвоты набора для
амплификации.
Расчет количества циклов (N) проводят по формуле
N = Р1к + 1,(1)
где Р — число исследований, заявленное производителем для данной тест-системы (набора
реагентов);
к — количество необходимых контрольных образцов согласно инструкции по применению.
Каждый цикл замораживания и оттаивания включает 30 мин оттаивания при комнатной темпе
ратуре и 60 мин замораживания при заявленной температуре хранения. После завершения процедур
замораживания/оттаивания проводят амплификацию положительного контроля в трех повторах и от
рицательного контроля.
При испытаниях тест-систем (наборов реагентов) для выявления РНК возбудителей для оценки
стабильности используют дополнительный контрольный образец, содержащий целевую РНК, и приме
няют его в сравнительных реакциях ОТ-ПЦР вместе с контрольными образцами, входящими в состав
тест-системы (набора-реагентов).
Если инструкция содержит специальные рекомендации по работе с компонентами набора (напри
мер, аликвотирование, работа на льду и т. п.), то стабильность оценивают с учетом данных рекоменда
ций и особенностей компонента.
5.2.4 Для проверки устойчивости к процессу транспортирования аликвоту компонентов тест-
системы (набора) хранят в термоизолирующей пенопластовой коробке во льду в течение максималь
ного срока транспортирования, указанного в инструкции по применению. После завершения хранения в
течение срока транспортирования ставят ПЦР положительного и отрицательного контролей в трех
повторах (и дополнительного контрольного образца, содержащего целевую РНК, если применимо).
5.2.5 Оценку стабильности реагентов для наборов с электрофоретической детекцией продуктов
ПЦР осуществляют визуально после этапа электрофореза на основании соответствия размера полу
ченного амплифицируемого фрагмента, а также отсутствия неспецифических фрагментов на электро-
фореграмме.
Соответствие размера амплифицируемого фрагмента определяют с использованием маркера мо
лекулярных масс ДНК.
5.2.6 Тест-систему (набор реагентов) с электрофоретической детекцией продуктов ПЦР считают
устойчивой к условиям транспортирования реагентов и многократному замораживанию/оттаиванию,
если после постановки сравнительных ПЦР контрольной аликвоты и аликвот после завершения про
цедур транспортирования и замораживания/оттаивания на электрофореграмме наблюдаются четкие
фрагменты ожидаемого размера.
5.2.7 Стабильность реагентов для наборов с гибридизационно-флуоресцентной детекцией про
дуктов ПЦР в режиме реального времени оценивают по значению коэффициента вариации значений Ct
для положительного контроля (а также контрольного образца, содержащего целевую РНК, для про-
6