ГОСТ Р 51921-2002
6.2.3.1 ПБЛ II-по [16].
6.2.3.2 Бульон Фразера (Fraser broth)— по [14], [15].
6.2.3.3 Состав питательных сред и способы приготовления приведены в приложении А (А.3.1, А.3.2).
6.2.4 Среды селективно-диагностические
6.2.4.1 Среда ПАЛ — по [18].
6.2.4.2 Оксфордский агар (Oxford agar) — по [14], [15].
6.2.4.3 ПАЛКАМ агар (PALCAM agar) — по [14], [15], [17].
6.2.4.4 Состав питательных сред и способы приготовления приведены в приложении А (А.4.1 — А.4.3).
6.2.5 Среды для изучения биологических свойств при идентификации листерий
6.2.5.1 Питательная среда ГРМ №1 — по [19].
6.2.5.2 Кровяной агар
К 100 см3 растопленного и охлажденного до 45 — 50 °С МПА с 1 % глюкозы добавляют 5 — 10 см3 стерильно взятой дефибринированной крови животных. Смесь осторожно перемешивают и разливают в чашки Петри (не более 10 см3 на чашку). Слой агара должен быть равномерно окрашен в красный цвет. Среду подсушивают при (37 ± 1) °С в соответствии с ГОСТ 26670 (4.2.1) и хранят не более 2 сут при температуре (4 ± 1) °С. Среда должна иметь рН 7,2 — 7,4.
Для посева используют теплые чашки.
6.2.5.3 Лецитин-агар с активированным углем и без угля
К питательной среде ГРМ № 1 перед стерилизацией добавляют 0,5 % активированного угля, растертого до порошкообразного состояния.
Желток куриного яйца разводят с соблюдением правил асептики в 150 см3 физиологического раствора и добавляют в количестве 5 % по объему к стерилизованной и охлажденной до 40 — 45 °С питательной среде. Разливают в чашки Петри не более 20 см3 на чашку и подсушивают при (37 ± 1) °С.
Аналогично готовят агар с добавлением желтка без добавления активированного угля.
6.2.5.4 Нитратную среду готовят по ГОСТ 10444.8 (3.2.9).
6.2.5.5 Полужидкую питательную среду (Listeria motility medium) для определения подвижности листерий готовят в соответствии с приложением А.5.1.
6.2.5.6 Среды Гисса готовят по ГОСТ 10444.1 (5.29), используя в качестве углевода рамнозу, ксилозу, маннозу и маннит.
6.2.5.7 МПБ с 0,5 % глюкозы готовят по ГОСТ 10444.1 (5.13), но при приготовлении добавляют 5 г глюкозы.
6.2.5.8 МПА готовят по ГОСТ 10444.1 (5.12).
6.3 Среды по 6.2.2, 6.2.3, 6.2.4 готовят накануне или непосредственно перед использованием в соответствии с указанием на этикетке.
Готовые среды хранят в темноте, так как отдельные компоненты, входящие в их состав, например акрифлавин, могут окисляться на свету, образуя продукты, подавляющие рост листерий.
7 Проведение исследования
7.1 Предварительное селективное обогащение
Навеску пищевого продукта массой (25 ± 0,1) г или объемом (25 ±0,1) см3 по 5.1 вносят в 225 см3 одной из жидких сред для предварительного обогащения, приготовленных по 6.2.2. Содержимое встряхивают 25-кратными круговыми движениями радиусом 30 см.
Массу навески продуктов детского, лечебного или специализированного питания отбирают по 5.1. Соотношение между количеством высеваемого продукта и питательной средой должно составлять 1:9.
Посевы культивируют при температуре (30 ± 1) °С в течение (24 ±2) ч.
При росте листерий на полуконцентрированном бульоне Фразера, содержащем эскулин, отмечают почернение среды за счет гидролиза гликозида эскулина до глюкозы и эскулетина. Эскулетин реагирует с ионами железа, образуя комплекс черного или оливкового цвета.
На ПБЛ I, не содержащем эскулин, почернение не происходит.
7.2 Селективное обогащение
После инкубирования продукта по 7.1 содержимое среды, независимо от наличия в ней
4