ГОСТ Р 51921-2002
7.5.2 Определение р-гемолитической активности
7.5.2.1 Для определения р-гемолитической активности выделяют изолированную колонию листерий, полученную по 7.3.3, и высевают бактериологической петлей на поверхность кровяного агара, приготовленного с добавлением стерильной дефибринированной крови животных по 6.2.5.2. Посевы инкубируют при температуре (37±1) °С в течение 24 ч.
Чашки просматривают в проходящем свете и отмечают образование зон р-гемолиза.
Listeria monocytogenes обладает р-гемолитической активностью с образованием узких зон просветления среды под или вокруг колоний.
7.5.2.2 Допускается вспомогательно для подтверждения гемолитической активности использовать КАМП-тест (CAMP-test).
7.5.2.2.1 Двухсуточные культуры гемолитических штаммов Staphylococcus aureus и Rhodococcus equi высевают на кровяной агар, как показано на рисунке 1. Между вертикальными линиями Staphylococcus aureus и Rhodococcus equi, как показано на рисунке 1, засевают параллельными линиями исследуемые культуры на расстоянии друг от друга не менее 1 см и от вертикальных линий — 0,5 см.
7.5.2.2.2 Желательно для контроля сделать посев тест-штамма Listeria monocytogenes 766 аналогично посеву исследуемых культур по 7.5.2.2.1.
7.5.2.2.3 Посевы инкубируют при температуре (37 ± 1) ° С в течение 24 ч. Отмечают изменение (расширение и просветление) зоны гемолиза в зонах, соседствующих с вертикальными штрихами стафилококка и родококка.
Listeria monocytogenes дает положительную КАМП-реакцию (расширение и просветление зоны гемолиза) около штриха Staphylococcus aureus и отрицательную (отсутствие изменений зоны гемолиза) — около штриха Rhodococcus equi.
5 и 6 — культуры Rhodococcus equi и Staphylococcus aureus соответственно; параллельные горизонтальные линии — исследуемые культуры
Рисунок 1 —Схема посева при постановке КАМП-теста
7.5.3 Определение лецитиназной активности
7.5.3.1 Дно чашек Петри делят на несколько секторов или квадратов и исследуемые культуры, полученные по 7.3.3, высевают короткими штрихами по одной на сектор (квадрат). Засев каждой исследуемой культуры проводят параллельно на чашки, содержащие и не содержащие уголь.
Посевы инкубируют при температуре (37 ± 1) °С в течение 48 ч.
Чашки просматривают в проходящем свете и отмечают наличие (отсутствие) лецитиназной активности на чашках, содержащих и не содержащих активированный уголь.
Listeria monocytogenes дает плотную зону помутнения шириной 3,0 — 6,0 мм на питательной среде с активированным углем за счет гидролиза лецитина.
Listeria monocytogenes гидролизует лецитин только в присутствии активированного угля. На среде, не содержащей активированный уголь, Listeria monocytogenes не обладает лецитиназной активностью (таблица 1).
7.5.3.2 Желательно для контроля сделать посев тест-штамма Listeria monocytogenes 766 аналогично посеву исследуемых культур по 7.5.3.1.
7.5.4 Постановка реакции агглютинации для идентификации Listeria monocytogenes Реакцию агглютинации для идентификации Listeria monocytogenes выполняют на стекле с
помощью поливалентной листериозной агглютинирующей сыворотки, содержащей антитела 0-11, V, VI, VII, IX и Н-АВ.
Предназначенную для идентификации чистую культуру, выращенную в течение 24 ч в питательном бульоне по 7.3.3 при (37±1) °С, засевают бактериологической петлей частым штрихом в две
8