14
см3 фосфатного буферного раствора (6.1.3) и помещают на 1 мин на ультразвуковую баню. Экстракт фильтруют через мембранный фильтр.
7.3 Очистка подготовленных проб методом твердофазной экстракции (ТФЭ)
Картриджи для твердофазной экстракции вместимостью 6 см3 c 0,5 г сорбента C18 40 мкм кондиционируют на вакуумном устройстве для ТФЭ, пропуская последовательно: 4 см3 метанола, 1 см3 деионизованной воды, 3 см3 фосфатного буферного раствора молярной концентрации с = 0,1 моль/дм3 (6.1.3). Пропускают через картридж пробу, полученную в соответствии с 7.2.1.1—7.2.1.7, в фосфатном буфере (на всех этапах ТФЭ, кроме этапов сушки, вакуум не применяют). Промывают картридж последовательно два раза фосфатным буферным раствором по 2 см3, раствором уксусной кислоты молярной концентрации с = 1 моль/дм3—1см3 и затем сушат картридж в вакууме 20 мин. Далее промывают картридж 2 см3 метанола и снова сушат в вакууме 10 мин. Элюируют аналиты раствором аммиака в изопропиловом спирте (6.1.6). Упаривают элюат на ротационном испарителе при температуре не выше 45 °С. Остаток перерастворяютв1 см3 абсолютного этанола ипереносятво флакон вместимостью 4 см3. Упаривают этанол досуха в токе азота на нагревательном модуле при температуре от 35 °С до 40 °С не менее 1 ч.
Каждую новуюпартиюсорбента необходимотестироватьпоописанной процедуре ТФЭ. Притести- ровании используют стандартные растворы бета-адреностимуляторов известной молярной концентрации в фосфатном буферном растворе (6.1.3). Модифицируют только два этапа: объем метанола на стадии промывки сорбента (критично для анилиновых бета-адреностимуляторов) и объем элюирующего раствора на последней стадии (критично для бета-адреностимуляторов фенольного типа).
- Порядок выполнения измерений
- Дериватизация бета-адреностимуляторов
- Для получения триметилсилиловых производных бета-адреностимуляторов к сухому остатку после ТФЭ очистки по 7.3 пипеточным дозатором приливают 50 мм3 смеси МСТФА/ТМИС/ДТЭ (6.1.5). Помещают флаконы в нагревательный модуль на 60 мин при температуре 60 °С. По истечении указанного времени реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, переносят в стеклянные флаконы вместимостью 2 см3 с вставками на 100 мм3 и используют для ГХ-МС анализа.
- Для двухстадийной дериватизации к сухому остатку после ТФЭ очистки, пипеточным дозатором приливают 50 мм3 раствора метилборной кислоты в этиловом эфире уксусной кислоты (6.1.7). Полученную реакционную смесь выдерживают при комнатной температуре 20 мин. По истечении указанного времени от 1 мм3 до 2 мм3 реакционной смеси вводят в хромато-масс-спектрометр. Получают хроматограмму циклических метилборатов.
Затем реакционную смесь упаривают досуха и к сухому остатку добавляют 50 мм3 раствора БСТФА/ТМХС (6.1.5). Полученную реакционную смесь помещают в нагревательный модуль при температуре 60 °С на 30 мин. По истечении указанного времени реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, переносят в стеклянные флаконы вместимостью 2 см3 с вставками на 100 мм3 ииспользу- ют для ГХ-МС анализа.
- ГХ-МС анализ
- В инжектор хроматографа вводят по 1—5 мм3 анализируемой пробы и проводят анализ в условиях, указанных в 6.4. Проводят не менее двух определений для каждой анализируемой пробы.
- Время удерживания бета-адреностимуляторов определяют при анализе градуировочных растворов. Время удерживания идентифицированных бета-адреностимуляторов в анализируемой пробе не должно отличаться от времени удерживания бета-адреностимуляторов в градуировочном растворе более чем на 2,5 %.
Данные о диагностических ионах триметилсилиловых производных бета-адреностимуляторов приведены в таблице 2.