ГОСТ Р 54032-2010; Страница 13

1. Пробу печени или почек измельчают на гомогенизаторе и взвешивают на весах по 10,0 г гомогенизированной пробы в двух флаконах вместимостью 40 см3. Во флаконы добавляют по 20 см3 фосфатного буферного раствора (6.1.2), измеряют рН и, при необходимости, доводят значение рН до

0. раствором гидроокиси калия (6.1.8) молярной концентрации с = 1 моль/дм3 или 25 %-ным водным раствором соляной кислоты (6.1.12). Пипеточным дозатором вносят по 50 мм3 смеси дейтерированных стандартных образцов массовой концентрации 10 нг/см3 и ставят флаконы на ультразвуковую баню на 20 мин при температуре 40 °С. Затем пробы переносят на шейкер, гомогенизируют 30 секи охлаждаютдо комнатной температуры. Флаконы с пробами помещают на центрифугу и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин при температуре 4 °С. Затем во флаконы приливают 5 см3 фосфатного буферного раствора (6.1.2), экстрагируют 30 с на шейкере и центрифугируют. Экстракты объединяют, измеряют рН и, при необходимости, доводят значение рН до 5,0 раствором гидроокиси калия молярной концентрации с = 1 моль/дм3 (6.1.8) или 25 %-ным водным раствором соляной кислоты (6.1.12). Пипеточ­ным дозатором в экстракты вносят по 50 мм3 пищеварительного сока Helix pomatia, помещают на нагре­вательный модуль с магнитной мешалкой при температуре 40 °С на 15 ч. После гидролиза пробу охлаждаютдо комнатной температуры, измеряют рН и, при необходимости, доводят значение рН до 6,0 25 %-ным водным раствором соляной кислоты (6.1.12). Гидролизат центрифугируют и фильтруют через мембранный фильтр.

2. Во флакон вносят 10 см3 мочи, 10 см3 ацетатного буферного раствора (6.1.4), 50 мм3 пище­варительного сока Helix pomatia, измеряют рН и, при необходимости, доводят значение рН до 5,0 раство­ром гидроокиси калия молярной концентрации с = 1 моль/дм3 (7.2.8) или 25 %-ным водным раствором соляной кислоты (6.1.12). Пипеточным дозатором вносят по 50 мм3 смеси дейтерированных стандар­тных образцов массовой концентрации 10 нг/см3 и ставят флаконы на нагревательный модуль при тем­пературе 40 °С на 15 ч для ферментативного гидролиза коньюгатов. Гидролизат охлаждают до комнатной температуры, измеряют рН и, при необходимости, доводят значение рН до 6,0 25 %-ным водным раствором соляной кислоты (6.1.12), фильтруют через мембранный фильтр.
3. Во флакон вносят 5 см3 желчи, 15 см3 ацетатного буферного раствора (6.1.4), 100 мм3 пищеварительного сока Helix pomatia. Далее проводят обработку пробы в соответствии с 7.2.3.
4. Сетчатку отделяют от глазного яблока, помещают во флакон вместимостью 40 см3 и взве­шивают на весах. На каждые 50 мг сетчатки добавляют 1 см3 фосфатного буферного раствора (6.1.2). Затем гомогенизируют 30 с на гомогенизаторе конфигурации ротор-статор. Во флаконы вместимостью 40 см3 вносят по 1 см3 гомогенизированной пробы и добавляют по 9 см3 ацетатного буферного раство­ра (6.1.4). Пипеточным дозатором вносят 50 мм3 пищеварительного сока Helix pomatia и по 50 мм3 смеси дейтерированных стандартных образцов массовой концентрации с =10 нг/см3. Закрывают флаконы крышкой с тефлоновой прокладкой и помещают на нагревательный модуль с магнитной мешалкой на 15 ч при температуре 40 °С. Полученный гидролизат охлаждают до комнатной температуры, измеряют рН и, при необходимости, доводят значение рН до 6,0 раствором гидроокиси натрия молярной концен­трации с =10 моль/дм3 (6.1.9). Флаконы с пробами помещают на центрифугу и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин при температуре 4 °С.Гидролизат фильтруют через мембранный фильтр.
5. 100 г кормов измельчают на гомогенизаторе и взвешивают на весах по 10,0 г гомогенизиро­ванной пробы в двух флаконах вместимостью 40 см3. Во флаконы добавляют 25 см3 соляной кислоты молярной концентрацией с = 0,01 моль/дм3 (6.1.11). Пипеточным дозатором вносят по 50 мм3 смеси дей- терированныхстандартныхобразцов массовой концентрации 10 нг/см3. Флаконы помещают в шейкер на 30 мин, а затем центрифугируют. Надосадочный слой переносят во флакон вместимостью 40 см3, добав­ляют 5 см3 н-Гексана, экстрагируют два раза по 2 мин, отбрасывая гексановые фракции. Измеряют рН водного остатка и, при необходимости, доводят значение рН до 6,0 раствором гидроокиси натрия моляр­ной концентрации с =10 моль/дм3 (6.1.9), помещают на центрифугу и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин при температуре 4 °С. Экстракт фильтруют через мембранный фильтр.
6. 10 г пигментированной шерсти промывают 0,2 %-ным водным раствором твин 20 и деиони­зованной водой, высушивают в сушильном шкафу при температуре 40 °С и измельчают ножницами на отрезки размером от 1 до 2 мм. Измельченную шерсть взвешивают на весах и по 1,0 г помещают в два флакона вместимостью 40 см3. Во флаконы добавляют по 20 см3 раствора гидроокиси натрия молярной концентрации с = 2 моль/дм3 (6.1.10). Затем во флаконы вносят пипеточным дозатором по 50 мм3 смеси дейтерированных стандартных образцов массовой концентрации с = 10 нг/см3.

Флаконы ставят на нагревательный модуль с магнитной мешалкой на 1 ч при температуре 85 °С. Затем охлаждают до комнатной температуры, добавляют 10 см3 метил-третбутилового эфира, экстраги­руют два раза по 5 мин, собирая эфирную фракцию в выпарительную колбу вместимостью 100 см3. Для полного отделения метил-третбутилового эфира флаконы помещают на центрифугу и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5 мин. Затем во флаконы вносят по 5 г натрия хлористого, перемешивают и повторноэкстрагируютдваждыпо5мин с10см3смесиэтиловогоэфирауксуснойкислоты иизопропило- вого спирта в соотношении 60:40. Объединенные экстракты упаривают на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °С.К сухомуостаткуприливают 10