ГОСТ 30347-97
можно было определить наличие или отсутствие Staphylococcus aureus в определенной массе
(объеме), указанной в нормативном документе на конкретный продукт.
5.1.1.2 Навеску продукта или его разведения засевают по 1 см5 в пробирки или колбочки с
солевым бульоном (3.2.4).
Соотношение между количеством высеваемого продукта или его эквивалентным разведением и
питательной средой 1: 10.
Пробирки и колбочки с посевами выдерживают в термостате при температуре (37 ± 1) "С в
течение 24 ч.
5.1.1.3 Дзя подтверждения принадлежности микроорганизмов, выросших на солевом бульоне, к
Staphylococcus aureus делают пересев петлей из бульона для получения изолированных колоний на
чашки Петри с подсушенными средами типа Байрд-Паркера (3.2.7). желточно-солевой агар или
молочно-солевой агар (3.2.5: 3.2.6).
Чашки с посевами выдерживают в термостате при температуре (37 ± 1) ‘С в течение 24—48 ч.
5.1.1.4 После термостатирования посевы просматривают и отмечают рост характерных коло
ний.
На желточно-солевом агаре колонии Staphylococcus aureus имеют форму плоских дисков диамет
ром 2—4 мм белого, желтого, кремового, лимонного, золотистого цвета с ровными краями; вокруг
колоний образуется радужное кольцо и зона помутнения среды.
На молочно-солевом агаре колонии Staphylococcus aureus растут в виде непрозрачных круглых
колоний, окрашенных от белого до оранжевого цвета, диаметром 2—4 мм. слегка выпуклых.
На среде Байрд-Паркера колонии Staphylococcus aureus растут в виде черных, блестящих,
выпуклых колоний диаметром 1—1,5 мм. окруженных зоной просветления среды шириной 1—3 мм.
5.1.1.5 С каждой чашки Петри отбирают не менее пяти характерных колоний и пересеивают на
поверхность скошенного питательного агара, как указано в 3.2.5, но без добавления хлористого
натрия и желточной эмульсии.
Посевы выдерживают в термостате при температуре (37 ± 1) ’С в течение 24 ч.
У выросших колоний определяют отношение к окраске по Граму и коагулированию плазмы
кролика.
5.1.1.6 Из пяти изолированных, характерных для Staphylococcus aureus колоний, делают препара
ты, окрашивают по Граму и микроскопируют.
Для приготовления препарата на чистое и охлажденное после фламбировання предметное стекло
наносят петлей каплю дистиллированной воды, в которую вносят петлей небольшое количество
агаровой культуры, не размешивая в воде. Затем вносят петлей каплю реактива 1, приготовленного
по 4.1.3.1. Смесь распределяют на участке примерно 1см2, просушивают при температуре (20 ± 2) *С
и фиксируют, медленно пронося предметное стекло над пламенем горелки. На одном стекле можно
готовить по шесть —восемь мазков, отделяя их один от другого линиями, проведенными с лицевой
стороны стекла.
Препарат ополаскивают водой и тщательно просушивают фильтровальной бумагой.
После просушивания на препарат наносят с избытком реактив 2. приготовленный по 4.1.3.2 так,
чтобы жидкость покрыла всю поверхность стекла. Продолжительность окрашивания 0,5 —1 мин.
После окрашивания препарат быстро ополаскивают проточной водой, направляя струю под углом на
стекло, помещенное вертикально. Препарат просушивают фильтровальной бумагой и просмат
ривают под микроскопом с иммерсионной системой. Микробы, красящиеся по Граму, будут
темно-фиолетового цвета, не красящиеся по Граму —красного цвета.
Стафилококки окрашиваются по Граму положительно (темно-фиолетового цвета), имеют шаро
образную форму и располагаются скоплениями, чаше всего напоминающими гроздья винограда.
5.1.1.7 Постановка реакции плазмокоагуляиии
В пробирку с 0,5 см3 разведенной кроличьей плазмы вносят петлю суточной агаровой
культуры. Внесенную культуру тщательно размешивают. Одну пробирку с плазмой оставляют
незасеянной, а в другую засевают контрольный штамм Staphylococcus aureus (коагулазоположи-
тельный стафилококк). Пробирки помешают в термостат и выдерживают при температуре
(37 ± 1) ‘С в течение 3—6 ч. Если через 6 ч коагуляции плазмы не произошло, то оставляют эти
пробирки до 24 ч. Если через 24 ч плазма не свернулась, то испытуемую культуру стафилококка
относят к коагулазоотрнцательной.
При определении коагулазной активности реакцию считают отрицательной в тех случаях, когда
в плазме не образуются отдельные нити или сгустки, или в тех случаях, когда в плазме появились
отдельные нити (реакцию плазмокоагуляиии оценивают на один плюс).
4