ГОСТ Р ИСО 10993.16-99
зависит от информации, которую нужно получить, возможности применения материала, меченного
радиоизотопами, и используемого метода анализа. При исследовании кинетических параметров
константа скорости процесса абсорбции может быть достоверно вычислена при условии, что в фазе
абсорбции взято достаточное количество проб.
П р и м е ч а н и е —Существуют методы in vitro, которые лают важную информацию о желудочно-ки
шечной и кожной абсорбции химических веществ.
5.2.3 Р а с п р е д е л е н и е
5.2.3.1 Для исследования процесса распределения, как правило, используют помеченное ра
диоизотопами вещество. Исследования могут быть:
- количественными, определяющими уровни вещества в срезах тканей;
- качественными, использующими общую ауторадиографию;
- полуколичественными. использующими струкцию по степеням ауторадиографическнх стан
дартов.
5.2.3.2 Обычно при изучении процесса распределения временем отбора проб является /тах, т. е.
24 ч и 168 ч или более, в зависимости от выведения исследуемого вещества. Отбор проб в проме
жуточные интервалы времени производят, когда требуются дополнительные данные. Более частый
отбор проб обычно выполняют в ранних фазах абсорбции и выведения. При этом берут как можно
больше проб в течение фазы выведения (теоретически 3—4 периода полувыведепия) для того, чтобы
обеспечить более точное определение параметров.
Основным решающим фактором является чувствительность метода.
5.2.4 М е т а б о л и з ми э к с к р е ц и я
5.2.4.1 Клетки для содержания животных при изучении метаболизма должны позволять про
изводить отдельный сбор мочи и фекалии на всех этапах исследования. При длительности исследо
ваний до 14 сут мочу и фекалии отбирают отдельно через 24 ч и потом —через каждые 24 ч до конца
эксперимента. Иногда план исследований может предусматривать забой животных на промежуточ
ных стадиях. Пробы могут быть отобраны раньше 24 ч. когда есть вероятность быстрого выведения
исследуемого вещества или его метаболитов. При длительных исследованиях отбор проб в начальном
периоде производят так же, как для кратковременных исследований. Соответственно пробы отби
рают непрерывно в течение 24 ч через установленный интервал времени.
П р и м е ч а н и е —Использование клеток для изучения метаболизма при длительных исследованиях
может быть вредным для здоровья животных. Поэтому при продолжительном эксперименте представительные
пробы, полученные через определенные интервалы времени, собирают, и эти результаты экстраполируются
как при непрерывном отборе проб.
5.2.4.2 Трупы животных и их органы-мишени сохраняют для исследований, а кровь этих
животных забираютдля определения концентрации веществ в плазме и цельной крови. После отбора
проб в момент забоя клетки для исследований метаболизма, моче- и калосборники моют специаль
ными растворителями. Полученные смывы сливают и репрезентативную часть сохраняют для
анализов.
5.2.4.3 Когда используют вещество, помеченное радиоизотопами (см. примечание ниже), рас
четное восстановление исследуемого вещества в норме должно быть (100±10)
%.
Количество иссле
дуемого вещества в каждой фракции анализируют с помощью установленных процедур для каждого
меченного или не меченного радиоизотопами вещества в соответствующей среде. При использова
нии веществ, меченных радиоизотопами, проводят оценку как первичного вещества, так и метабо
литов. если при этом не были использованы специальные методики. Если вещество, меченное
радиоизотопами, не восстанавливается в достаточном количестве в экскрете (фекалиях и/или моче)
или ворганизме подопытного животного, рассматривают необходимость сбора выдыхаемого воздуха.
11р и м еч а н и с —Нс во всех случаяхдостижима требуемая степень восстановления. Причины любых
отклонений регистрируют и обосновывают в отчете об исследованиях.
5.2.4.4 Уровни радиоактивности в биологической среде определяют подсчетом, например
методом сцинтилляции жидкости. Однако следует подчеркнуть, что в данном методе используется
смешанная концентрация вещества и его метаболитов, поэтому на ее основе не могут быть опреде
лены кинетические параметры. Там, где необходимо отделение метаболитов, используют ряд про
цедур экстракции и хроматографических методов анализа (например, методы высокоэффективной
жидкостной хроматографии, хроматографии в тонком слое сорбента —тонкослойной хроматогра-
5