С. 4 ГОСТ 28038-89
5. ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ
5.1. П р и г о т о в л е н и ев о д н о йв ы т я ж к иизо б р а з н а
Навеску соков, пюре, напитков массой 50,0 гили повидла, джема, варенья,фруктового порошка
массой 25.0 г помешают в стеклянный стакан, смешивают с небольшим количеством дистиллиро
ванной воды и количественно переносят в мерную колбу вместимостью 250 см3. В мерную колбу
вносят 15 см3 раствора Карреза 1 и 15 см3 раствора Карреза И. Содержимое колбы доводят
дистиллированной водой до метки, тщательно перемешивают и фильтруют в мерный цилиндр через
бумажный складчатый фильтр. Собирают 50 см3 фильтрата.
5.2. Э к с т р а к ц и я
Фильтрат из цилиндра переносят в делительную воронку. Этим же цилиндром отмеряют 50 см3
этилацетата, переносят его в делительную воронку и в течение 1 мин интенсивно перемешивают
содержимое. Смеси дают отстояться и после полного разделения водный нижний слой сливают
обратно в цилиндр, а этилацетатный экстракт переносят в сухую плоскодонную колбу. Экстрагиро
вание остатков патулина из водной фазы проводят еще раз в аналогичных условиях свежей порцией
этилацетата. При этом после одноминутного перемешивания в делительную воронку вносят 10 г
хлористого натрия и продолжают перемешивать еще в течение 0,5 мин. После разделения слоев
водную фазу отбрасывают, а объединенные этилацетатные экстракты высушивают в плоскодонной
колбе при добавлении 15—20 г сернокислого натрия. После высушивания экстракт фильтруют через
ватный тампон вотгонную грушевидную колбу. Оставшийся сернокислый натрий ополаскивают 10см3
этилацетата, которые затем также фильтруютвотгонную колбу. Экстрактупаривают на ротационном
испарителе при температуре 35—40 °С до объема около 1см3.
5.3. О ч и с т к аэ к с т р а к т а
На дно стеклянной колонки помещают ватный тампон, поверх которого насыпают слой
сернокислого натрия толщиной 5 мм. В колонку вносят суспензию 2 гсиликагеля в 15см3бензола.
Не давая просохнуть слою силикагеля, поверх него насыпают слой сернокислого натрия толщиной 10
мм. Бензолу дают стечь, после чего на верхний слой сернокислого натрия наносят экстракт.
Экстракту дают полностью впитаться в фильтрующий стой. Отгонную колбу ополаскивают 0.5 см3
этилацетата, смыв переносят на колонку и дают ему полностью впитаться в фильтрующий слой.
В колонку вносят 25 см3 бензола, дают ему полностью пройти через фильтрующий слой,
выходящий элюат отбрасывают. В колонку вносят 100 см3 смеси бензола с этиланетатом (3 : I). С
этого момента начинают отбирать выходящий элюат. После прекращения выхода растворителя из
колонки элюат переносят в остродонную колбу и упаривают досуха на ротационном испарителе при
температуре 35—40 ЬС. Остаток в отгонной колбе растворяют в 0,2 см3 смеси бензола с
ацетонитрилом (9 : 1) для анализа методом тонкослойной хроматографии или в 0,2 см3 этилового
спирта для анализа методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.
5.4. Х р о м а т о г р а ф и ч е с к о ер а з д е л е н и е
Пластинку «Силуфол* на расстоянии 2 см от краев размечают тонкими карандашными
линиями. В точку пересечения линий в правом нижнем углу наносят с помощью микрошприца
0.02 см3 исследуемого раствора. В правом верхнем и левом нижнем углах на стартовых линиях
отмечают по три точки, в которые микрошприцем наносят различные объемы первого стандартного
раствора патулина. Количество патулина в пятнах должно быть от 10 до tSOиг. Пластинку одной из
стартовых линий вниз помешают в камеру для тонкослойной хроматографии, предварительно
заполненную смесью хлороформ-ацетон ( 4: 1) на высоту около I см. Развитие хроматограммы
проводят в первом направлении до достижения фронтом растворителя карандашной линии. Плас
тинку извлекают из камеры и сушат до исчезновения запаха растворителя. Высушенную пластинку
помещают второй стартовой линией вниз в камеру для тонкослойной хроматографии, предваритель но
заполненную смесыо толуол-этилацетат-муравьипая кислота ( 5 : 4 : I) на высоту около I см.
Проводят развитие хроматограммы во втором направлении до достижения фронтом растворителя
карандашной линии. Пластинку извлекают из камеры и сушат до исчезновения запаха растворителя.
5.2—5.4. (Измененная редакция, Изм. № 2).
5.5. О б н а р у ж е н и еп а т у л и н а
На вставку эксикатора ставят стеклянный стакан вместимостью 150 см3 с 25 см3 раствора
марганцовокислого калия, рядом помещают хроматографическую пластинку. Эксикатор плотно
закрывают крышкой и к раствору марганцовокислого калия по каплям приливают 25 см3 соляной
кислоты из капельной воронки, вставленной в отверстие крышки эксикатора. По истечении 15 мин
пластинку извлекают из эксикатора, оставляют еще на 10 мин в вытяжном шкафу, а затем
опрыскивают из распылителя раствором бензиднна. Хроматографическую пластинку сушат в токе
142