ГОСТ 25386-91 С 21
В пробирку с 5—10 см3 питательной среды вносят 0,5—1,0 см3
культуры. Максимальное накопление лептоспир наблюдается че
рез 4—7 сут культивирования при 28 ~30°С.
Рост и чистоту культур лептоспнр в жидких питательных
средах контролируют микроскопически в темном поле микроско
па и макроскопически — просмотром пробирок с культурами в
луче света от осветителя. При этом после встряхивания в пита
тельной среде четко просматриваются муаровые волны, образуе
мые выросшей культурой.
Культуру лептоспнр пересевают через каждые 12—15 сут не
менее чем в три пробирки.
Штаммы лептоспнр,постоянно поддерживаемые в лаборато
рии, хранят в пробирках под вазелиновым маслом, в запаянных
ампулах, в морозильной камере при минус 60—70 °С или при
температуре жидкого азота минус 196 “С. Лептоспиры консерви
руют любым из этих методов после выращивания и сывороточ ной
среде до максимального накопления.
В пробирку на культуру «наслаивают I—1,5 см1 стерильного
вазелинового масла или культуру расфасовывают в стерильные
ампулы из нейтрального стекла вместимостью 1—5 см* и запаи
вают. Хранят пробирки и ампулы в темном месте при комнатной
температуре без пересевов в течение 3 мос.
Для хранения в замороженном состоянии культуры расфасо
вывают в ампулы, запаивают, охлаждают до 0—4и помещают
в сосуды Дьюара, заполненные азотом, или в морозильную ка
меру. В жидком азоте лептоспиры хранят без пересевов в тече
ние года, при этом они заметно нс изменяют биологических
свойств.
Культуры лептоспнр, конгаминированные другими микроор
ганизмами, очищают биологическим методом, фильтрацией че
рез бактерийные фильтры нлн пересевом на плотные питатель
ные среды.
Для очистки биологическим методом загрязненнуюкультуру
вводят анутрибрюшинко морской свинке или крольчонку в дозе
1—2 см8, хомяку или мыши — 0,5 см8. Через 30—60 мин кровь
нз сердца зараженного животного высевают в пробирки с пита
тельной средой, культивируют и ведут наблюдение, как указано
выше.
Для очистки методом фильтрациизагрязненнуюкультуру
фильтруют через асбестовыестерилизующиепластинымар
ки СФ или свечи Шамберляна Л-5.Фильтратрассеивают в
5—10 пробирок с питательной средой. В высевах из фильтрата
получают чистую культуру лептоспнр.
Очистку культур лептоспир на плотной питательной среде про
водят рассевом исследуемого материала шпателем в несколько
чашек Петри. Культуры лептоспир, обильно контаминированные