С. 12 ГОСТ 25386-91
2.22.7. Приг отов л е ниеб е з б е л к о в о й с р е д ы Шен~
берг а .
Для приготовления среды используют:
воду дистиллированную по ГОСТ 6709;
натрий фосфорнокислый двузамещенный по ГОСТ 11773;
ралий фосфорнокислый однозамещенный по ГОСТ 10075;
магний сернокислый по ГОСТ 4523;
сульфат железа (11) аммоний;
кислоту этилендиаминтетрауксусную;
твин-80;
твмн-60;
глицерин по ГОСТ 6259;
L — аспарагин;
витамин В|2;
витамин В(;
кальция карбонат но ГОСТ 3159;
кислоту соляную по ГОСТ 3118;
уголь активированный древесный;
фильтр мембранный.
Среду готовят следующим образом: к 1 дм’ дистиллированной
воды добавляют 0,531 г натрия фосфорнокислого двузамешенно-
го (Na2HP04), 0,069 г калия фосфорнокислого однозамешенного
(КН2Р04), 0,150 г сульфата магния (MgS04x7H20), 0,006 г суль
фата железа (11) — аммония FeS04-(NH4)2S04-6H20, 0,004 г Ca+t,
0,010 г этиленднаминтетрауксусной кислоты, 0,050 г твина-80,
0,200 г твнна-60, 0,200 г глицерина, 0,500 г L-аспарагина,0,01 г
витамина В|2 и 0,001 г витамина Bt. Са++ берут в виде карбона
та кальция и обрабатывают раствором соляной кислоты, вита
мин В| добавляют в среду асептически после стерилизации. Сре
ду нагревают до кипения,’ фильтруют, расфасовывают и стери
лизуют при 121 °С в течение 15 мни, конечноезначение pH сос
тавляет 7,4—7,6.
Для детоксикации добавляют к питательной среде сыворотку
крови или альбумин или соединяют твин с 0,5 частями по мас
се мелкого порошка древесного угля. Для этого 20 г отобранного
полисорбата разводят в 200 см’ дистиллированной воды при ком
натной температуре и перемешивают раствор до достижения
однородной консистенции. При помешивании к водному раство
ру медленно добавляют 40 г активированного древесного угля.
Отношение твина к древесному углю может варьироваться от 1:6
до 6:1. Помешивание продолжают до 18 ч при 22—25 °С, далее
отстаивают уголь в течение 18 ч при 4 °С. Раствор полисорбата
осторожно отделяют от осадка древесного угля, центрифугируют
в течение 1 ч при 10000 об/мин, фильтруют черезмембранный
фильтр для удаления оставшихся мелких частиц угля, хранят
раствор полисорбата при минус 20 °С.