ГОСГ 25386 -91 С 13
2.2.2.S.Приготовл енистеин(полисорбат)а л ь
б у м и н о в о йсреды Э л л и н г а у л е н а
Для приготовления среды используют:
аммоний хлористый по ГОСТ 3773;
цинк сернокислый по ГОСТ 417-1;
кальций хлористый по ГВХ;
магний хлористый по ГОСТ 4209;
железо сернокислое по ГОСТ 4148.
медь сернокислую по ГОСТ 4165;
•глицерин по ГОСТ 6259;
твин-80;
витамин Вг,
витамин В|2;
воду дистиллированную но ГОСТ 6709;
натрий фосфорнокислый однозамещениый;
калий фосфорнокислый;
натрий хлористый по ГОСТ 4233;
тиамин;
альбумин бычий;
натрия гидроокись.
Для приготовления среды готовит исходные водные растворы
грамм на 100 см’* воды): хлорида аммония (NH«CI) — 25, суль
фата цинка (ZnS0,X7M20) — 0,4, хлорида кальция(СаС12Х
x2HiO) — 1,0, хлорида магния (MgCl2X6H20) — 1,0, сульфата
железа (FeS04X7H?0 ) —0,5,сульфата меди (CuSO«X5HjO)— 0,3,
глицерина — 10, твина-80 — 10, витамина— 0,5,витамина
В,* — 0,02. Растворы хранят в замороженном состоянии.
Основную среду готовят добавлением к 997 см’ дистиллиро
ваннойводынатрияфосфорнокислогооднозаметенного
(NajHPOi) -1.0 г или (Na*HPO«X2H,0) — 1,2535 г.калия
фосфорнокислого(КН2Р04) — 0,3 г, хлорида натрия (NaCl) —
1.0 г и исходных растворов: хлорида аммония — 1,0 см3, тиами
на — 1,0 см*, глицерина 1,0 см\ pH доводят До 7,4, стерилизуют
в автоклаве при 121 °С в течение 20 мин.
Альбуминово-твиновая добавка представляет собой 10 %-ный
бычий альбумин, фракция V, 20 г которой добавляют к 100 см*
стерильного бидистиллята, при постоянном помешивании, до
бавляют исходные растворы: хлоридов кальция и магния по
3.0 см3, сульфата цинка — 2,0 см3,сульфата меди0.2 см3,
сульфата железа — 20,0 см3, витамина В12— 2,0 см3, твнна-80 —
25.0 см*, воды до 200 см3. Доводят pH до 7,4, используя гидрок сид
натрия, фильтруют через фильтр миллипор (0,22 микрон) или
Зейтца (0,2—0,3 микрон). Добавкуможнохранить при
(4± 1) °С или замороженной при минус 20 °С.
Среду для культивирования готовят добавлением1 части
альбумнновотвиновон добавки к 9 частям основной среды в ассп-