ГОСТ Р 51228-98
Этот объем воды используют для настройки спектрофотометра, колориметра по 9.1 и при опреде
лении всех значений оптической плотности по 9.4.
Если при настройке прибора было использовано другое количество воды, повторяют юстировку
с полученным объемом воды.
9.3 Э к с т р а к ц и яф е р м е н т а
9.3.1 Анализируемая навеска
Взвешивают в колбе или пробирке, снабженных пробками, около 5 г размолотого зерна (8.1.1)
или муки (8.1.2) с точностью ±0.05 г. Допускается использование меньшей навески продукта с
высокой ферментной активностью, при точности взвешивания 1 % и выше, если масса превышает
2/А грамм, где А —активность продукта в единицах.
9.3.2 Экстракция
К анализируемой навеске добавляют (100.0Ю.5) см3 раствора хлористого кальция (5.4). пред
варительно подогретого до 30 *С в водяной бане (6.1) и тщательно смешивают встряхиванием. Мосле
15, 30 и 45 мин вынимают колбу или пробирку из водяной бани, переворачивают вверх дном и
обратно 10раз и вновь погружают в баню. (Постоянное встряхивание дает варьирующие результаты,
поэтому не рекомендуется встряхивать чаще указанных периодов времени).
После 60 мин экстракции колбу или пробирку вынимают и без встряхивания немедленно
сливают содержимое в пробирку центрифуги или переносят на фильтр. Растворы не следует остав
лять в смесительном сосуде. Необходимо либо центрифугировать суспензию в течение 10 мин при
1000—2000 g. либо отфильтровывать требуемое количество, отбрасывая первые капли, до получения
прозрачного экстракта. Экстракты ржи желательно центрифугировать, так как их трудно фильтро
вать. Анализируют жидкость после фильтрования или центрифугирования.
9.4 О п р е д е л е н и ер а с щ е п л е н и як о н е ч н о г од е к с т р и н а
15.0 см3 ферментного экстракта (9.3.2) переносят с помощью пипетки в опытную пробирку’
или колбу емкостью 50 см3, закрывают ее пробкой и погружают в водяную баню (6.1) при 30 *С. В
другую пробирку или колбу заливают около 20 см3субстрата конечного декстрина (5.5),
закрывают пробкой и помещают также в водяную баню (6.1) при 30 ’С.
Когда экстракт и субстрат прогреются до 30 *С (приблизительно через 5—10 мин), переносят
пипеткой (с быстрым истеканием) 5,0 см’ субстрата в пробирку или колбу, содержащую 15,0 см3
экстракта, закрывают пробкой и перемешивают при энергичном встряхивании. Одновременно с
внесением субстрата включают секундомер (6.4).
В каждую из опытных пробирок или колб емкостью по 50 см3 вносят пипеткой 10.0 см3
разбавленного раствора йода (5.2), добавляют из бюретки объем воды, установленный при контроле
субстратного расгвора (9.2), смешивают путем вращения, закрывают пробки и погружают в водяную
баню (6.2) при 20 ‘С.
С интервалом 5 или 10 мин выполняют следующие действия:
а) наливают пипеткой 2,0 см3 смеси фермента и субстрата в одну из опытных пробирок или
колб, содержащих смесь разбаатенного раствора йода и воды;
б) смешивают путем вращения;
с) доводят температуру до 20 *С погружением в водяную баню (6.2);
д) залипают в кювету и измеряют оптическую плотность как в 9.2.
Температура растворов в спектрофотометре или колориметре влияет на оптическую плотность
и поэтому должна поддерживаться окаю 20 *С. Временной интервал между отмериванием пипет
ками и измерением оптической плотности обычно не имеет непосредственного атияния на резуль
таты, по не должен превышать I ч. Измерение оптической плотности серии растворов продолжают
пока не будет залита пипеткой последняя порция 2 см3 смеси ферментного экстракта и субстрата.
Концентрация фермента в реакционной смеси должна быть подобрана таким образом, чтобы
35—60 % субстрата разложилось в течение 15—40 мин. т.е. последнее значение оптической плотнос
ти должно составлять 40—65 % от оптической плотности, полученной при проверке субстратного
раствора (9.2). Если оптическая плотность уменьшается слишком быстро, необходимо разбавить
ферментный экстракт раствором хлористого кальция (5.4) и провести новое определение. Если
амилазная активность пробы низкая, что наблюдается у некоторых проб муки, то необходимо
увеличить время реакции до 60 мин и более для получения точных результатов.
П р и м е ч а н и я
1 Разложение субстрата вдиапазоне 35—60 %заопределенное время можно легко установить безприбора
посредством визуального сравнения. Смешивают 1 часть раствора субстрата конечного декстрина (5.5) с
4