ГОСТ Р 70110—2022
петлей наносят на сетку счетной камеры и покрывают шлифованным специальным покровным стеклом размером 18
х 18, толщиной (0,30 ± 0,05) мм. Допускается использовать покровные стекла размером 24 * 24 толщиной (1,16 ±
0,01) мм, при необходимости разводят пробу, так как в одном большом квадрате число клеток микроорга низмов не
должно превышать 60—80, а в пяти квадратах — 600. Жидкость должна быть равномерно распределена по
поверхности сетки, без пузырьков. Покровное стекло прижимают большими пальцами к боковым площадкам
счетной камеры и притирают до появления радужных (Ньютоновских) колец. При необходимости избыток жидкости
удаляют фильтровальной бумагой.
Подсчет клеток начинают через 3—5 мин после заполнения счетной камеры, для того чтобы клетки осели и
были видны под микроскопом в одной плоскости. Счетную камеру кладут на столик микроскопа и находят в поле
зрения сетку. Подсчет ведут в пяти больших квадратах, расположенных по диагонали или по углам и в центре
сет ки. Учитывают все клетки, лежащие в квадрате сетки, а также пересекающие верхнюю и правую стороны
квадрата, если наполовину или большей частью они расположены внутри квадрата. Клетки, большая половина
которых на ходится в другом квадрате, не подсчитывают. Точность определения зависит от того, насколько
плотно покровное стекло притерто к поверхности камеры, поэтому подсчет проводят несколько раз, например:
четыре раза и каждый раз — по 150—200 клеток в пяти больших квадратах. Общее число подсчитанных
клетокдолжно быть не менее 600.
Б.7.3 При подсчете клеток дрожжей, образующих конгломераты, необходимо к определяемой пробе перед
заполнением камеры добавлять равное количество раствора серной кислоты с массовой концентрацией 100 г/дм3
и встряхивать не менее 5 мин для разъединения скоплений клеток. При подсчете числа микроорганизмов в 1 см3
следует учитывать разбавление раствором серной кислоты.
Б.8 Обработка результатов
Подсчет проводят не менее чем в двух повторностях, заполняя и подсчитывая две сетки, и находят средне
арифметическое значение результатов в пяти больших квадратах.
Объем одного большого квадрата в счетной камере равен 1/250 мм3, соответственно объем пяти квадратов
равен 5/250 или 1/50 мм3. Для определения количества клеток в 1 см3 (в 1000 мм3) определяемой пробы нужно
среднюю сумму количества клеток в пяти больших квадратах умножить на 50 000. Число микроорганизмов в 1 см3
определяемой пробы,
М,
млн клеток/см3, вычисляют по формуле
М =50
000
■а ■п,
(Б.1)
где 50 000 — коэффициент пересчета объема пяти больших квадратов на 1 см3;
а
— общее число подсчитанных клеток в пяти больших квадратах;
п
— кратность разведения.
11