ГОСТ 8808-2000
ПРИЛОЖЕНИЕ Г
(обязательное)
Определение микотоксинов
(по биотесту с инфузориями)
Метод предназначен для определения микотоксинов в растительных маслах в условиях заводских лабора
торий и при проведении научных исследований.
Метод основан на реакции инфузорий тстрахимена пнрнфсрмис на наличие в экстракте из масла токси
нов. синтезируемых миисллиальнымн грибами при их развитии на используемом сырье.
Г.1 Отбор проб - по ГОСТ 5471.
Г.2 Аппаратура, реактивы, материалы
Весы лабораторные по ГОСТ 24104 3-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 1000 г.
Микроскопы с 7—8-кратным увеличением марок МБР-I. МБИ-1. МБИ-11, МБИ-15 и другие с анало
гичными характеристиками.
pH-метры лабораторные (иономеры) с пределом измерений 0—14 единиц pH и ценой деления шкалы
0,05 единиц pH. снабженные стеклянными или хлорссрсбряиыми электродами.
Воронка делительная ВД-1 — 500 ХС по ГОСТ 25336.
Колбы плоскодонные П-1-250-29/32 ТХС, П-2-250-34 ТХС, П-1-500-29/32 ТХС. П-2-500-34 ТХС.
П -1-1000-45/40 ТХС или колбы конические Кн-1-250-24/29 ТХС. Кн-2-250-34 ТХС. Кн-1-500-29/32 ТХС.
Кн-1 -500-34/35 ТХС. К н -1-500-45/40 ТХС. Кн-2-500-34 ТХС, Кн-2-500-40 ТХС. Кн-2-500-50 ТХС.
Кн 1-1000-45/40 ТХС. Кн-2-1000-42 ТХС по ГОСТ 25336.
Цилиндры мерные 1-2-50. 1-3-50. 1-4-50 и 1-2-250. 1-3-250. 1-4-250 по ГОСТ 1770.
Чашки Петри (биологические) БН -1-100 по ГОСТ 25336.
Пипетки градуированные l-I-l-l. 1-1-I-2 по ГОСТ 29228.
Пробирки П 1-14-120 ХС, П1-16-150ХС. П2-14-100ХС. П2-16-150 ХС. П2-16-180 ХС по ГОСТ 25336.
Стекло часовое.
Палочки стеклянные с оплавленными концами длиной 10—15 см. диаметром 0.3—0.5 см.
Автоклав.
Спиртовка.
Спирт этиловый технический по ГОСТ 17299 или спирт этиловый ректификованный технический по
ГОСТ 18300. растворе массовой долей 30 %.
Эфир петролейный по нормативному документу 110].
Эфир медицинский |11|.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Пептон по ГОСТ 13805.
Дрожжевой экстракт.
Глюкоза по ГОСТ 6038.
Натрий хлористый по ГОСТ 4233.
Культуру инфузорий тстрахимена пнрнформис.
Г.З Подготовка к испытанию
Г.3.1 Получение водно-спиртовых экстрактов из масла
В колбе вместимостью 250 см3 взвешивают около 50 г масла, записывают результат с точностью до вто
рого десятичного знака, добавляют 125 см1петролейного эфира, перемешивают и раствор сливают в делитель
ную воронку. Затем в колбу приливают 50 см5 раствора этилового спирта и проводят экстракцию
встряхиванием. После разделения слоев водно-спиртовой экстракт сливают в колбу вместимостью 250 см5, к
раствору масла в делительной воронке вновь добавляют 50 см3 раствора этилового спирта и экстракцию по
вторяют. Операцию экстракции проводят пять раз. Экстракты объединяют и определяют объем. Соотношение
(навеска : раствор этилового спирта) должно составлять 1:5.
Г.3.2 Приготовление иен тонной среды
Псптонную среду для вырашивания инфузорий (pH 7.1) готовят по следующей рецептуре:
пептон
-2 .0 г;
дрожжевой экстракт- 0.1 г,
глюкоза
-0.1 г:
хлористый натрий
-0.1 г;
дистиллированная вода- 100 см3.
Стерилизацию воды и среды проводят в течение 20 мин при давлении 0.06 мПа (0.6 атм.) в автоклаве.
Г.3.3 Поддержание жизнедеятельности культуры инфузорий тетрахнмена нмриформне
Для поддержания жизнедеятельности культуры инфузорий ежемесячно пересевают на свежую пептон-
ную среду. Пересев осуществляют в стерильных условиях.
В стеклянную пробирку, края которой стерилизуют непосредственно перед посевом в пламени спиртов
ки. приливают 4 см3пептонной среды, приготовленной, как указано в 3.2, и вносят 0.2 см3культуры инфузо-
10
92