ГОСТ 34104—2017
Программа амплификациидля идентификации ГМ рапса линий GT73, MON88302, RF2. MS1, MS8,
Т45, RF1. RF3, Topas19/2 приведена в таблице 12.
Т а б л и ц а 12 — Программа амплификации для идентификации ГМ линий рапса линий GT73. MON88302. RF2,
MS1. MS8, Т45. RF1. RF3. Topas19/2
Стадия
Температура
ВремяКоличество цишов
Детекция
Hold/Удержание
температуры
95 °С
15 мин1
_
Cycling/
Цитирование
95 °С
15с
—
60 °С
40
60
с
По каналам
FAM/Green.
JOE/Yellow
Детекциюфлуоресцентногосигналапроводятнаканалах FAM иJOE. По каналуFAM регистрируют
уровеньфлуоресценции участка части генно-инженерной конструкции, специфичной для генома тести
руемой генетическимодифицированнойлинии, поканалуJOE — дляэндогеннойДНК ГМсои. ГМкукуру
зы. ГМ рапса. Кривые накопления флуоресцентного сигнала анализируют с использованием
программногообеспечения используемого прибора для проведения ПЦР в режиме реального времени
(Real Time PCR).
9.5 Учет и интерпретация результатов
9.5.1 Полученные в ходе испытания данные (кривые накопления флуоресцентного сигнала) ана
лизируют понескольким каналамдетекции с использованием программногообеспечения прибора.
9.5.2 Результаты интерпретируют на основании наличия (или отсутствия) пересечения кривой
флуоресценциис установленнойнасоответствующем уровнепороговойлиниейна графике зависимос
ти интенсивности флуоресценции от количества циклов, что соответствует значению пороговогоцик
ла Ct.
9.5.3 Учет результатов испытания следует начинать с результатов амплификацииДНК контроль
ных образцов в соответствии с таблицами оценки результатов контрольных реакций (таблицы 8—11).
Для положительногоконтроляПЦРв таблицах результатов поканалам FAM/Green
иJOE/Yellowдолжны присутствовать значения порогового цикла Ct соответствующих значений в
зависимости от программы амплификации. Для отрицательного контроля экстракции и
отрицательного контроля ПЦР значения пороговогоциклаCtповсем каналамдолжны отсутствовать.
Отсутствиеположительногосигнала в про бе с положительным контролем ПЦР (К+) или превышение
граничного значения Ct. указанного в табли це. может свидетельствовать об ошибках, допущенных
на этапе постановки ПЦР. В таком случае необходимо провести этап ПЦР повторно.
Т а б л и ц а 13— Оценка результатов контролей для таблиц 4. 6. 8. 10
Контроля
Контролируемый этап
испытаний
Значение Ct по каналу
FAM/GreenJOE/Yellow
в -Экстракция ДНК
Нет значений
Нет значений
К-ПЦР
Нет значений
Нет значений
К«-ПЦР
<31
<31
Проба
<37
<35
В образце обнаруженаДНК сои/кукурузы, еслидляданной пробы в таблице результатовпо каналу
JOE/Yellow определенозначение порогового цикла Ct£35 (таблица 13). При получении значения Ct> 35
поканалуJOE/Yellowдляанализируемой пробы требуетсяповторноеиспытаниеданнойпробы, начиная
с первого этапа испытаний (экстракцияДНК). При повторном получении аналогичного результата обра
зец считаютне подлежащим испытанию из-за низкого содержания в немДНК кукурузы/сои.
ДНК ГМ линии считают обнаруженной, если для данной пробы в таблице результатов по каналу
FAM/Green определено значение пороговогоцикла Ct£37.
16