ГОСТ 30347—2016
При определении коагулазмой активности реакцию считают положительной, если:
+ ♦ + +- сгусток плотный;
+ ♦ +- сгусток, имеющий небольшой отсек;
+ ♦- сгусток в виде взвешенного мешочка.
Все три варианта являются положительным результатом. При получении положительной реакции
считают, что в посевах обнаружен коагулазоположительный стафилококк.
8.1.3.4 Оценка результатов подтверждения принадлежности характерных колоний к коагулазоло-
ложительным стафилококкам
Если при испытании типичных и атипичных колоний в них обнаружены грамположительные
кокки, образующие каталазу, способные коагулировать плазму крови, то считают, что выявленные
микроорганизмы относятся к коагулазоположительным стафилококкам.
8.1.4 Подтверждение принадлежности выявленных коагулазоположительных стафилококков
к S. aureus
Принадлежность выявленных коагулазоположительных стафилококков к S. aureus проводят по
определению их способности образовывать ацетоин и ферментировать мальтозу в аэробных условиях.
Дифференциация видов и подвидов коагулазоположительных стафилококков — в соответствии с при
ложением А.
8.1.4.1 Определение способности образования ацетоина (реакция Фогес-Проскауера)
Культуру высевают в пробирки со средой Кларка (6.2.7). Посевы инкубируют при температуре
(37 ± 1) °С в течение 48 ч.
После инкубирования посевов к 1 см3отобранной культуральной жидкости прибавляют 0.6 см3
раствора 1-нафтола (6.2.12) и 0,2 см3 раствора гидроокиси калия (6.2.11). После добавления каждого
реактива пробирку встряхивают. Появление розового окрашивания через (15 — 60) мин указывает на
положительную реакцию. S.aureus образует ацетоин.
8.1.4.2 Определение способности ферментации мальтозы в аэробных условиях
Исследуемые культуры высевают уколом петлей в среду Гисса с мальтозой (6.2.8) и инкубируют
при температуре (37 ± 1) еС в течение 48 ч. Изменение цвета среды указывает на положительную
реакцию. S. aureus ферментирует мальтозу в аэробных условиях.
8.1.4.3 Представление результатов определения количества S. aureus выражают: «обнаружены»
или «не обнаружены» в х см3или в х г продукта.
8.2. Метод определения количества S. aureus без предварительного обогащения
8.2.1 Сущность метода
Метод основан на высеве продукта или его разведении на поверхность плотной селективной сре
ды, инкубировании, подсчете типичных и (или) атипичных колоний, подтверждении по биохимическим
признакам принадлежности выделенных колоний к коагулазоположительным стафилококкам и S. aureus.
8.2.2 Проведение анализа
8.2.2.1 Выбор разведений для посева — по 8.1.2.1.
8 2.2.2 Посев
Навеску жидкого продукта или его разведения по 1 см3засевают на поверхность питательной
среды в одной чашке Петри диаметром 140 мм. либо наносят на поверхность питательной среды (6.2.2,
6.2.4. 6.2.5) в три чашки Петри диаметром 90 мм и тщательно растирают шпателем по поверхности.
Чашки Петри с посевом инкубируют дном вверх при температуре (37 ± 1) °С в течение (24 — 48) ч.
После термостатирования подсчитывают количество характерных типичных и/или атипичных колоний на
каждой чашке Петри.
На желточно-солевом агаре колонии S. aureus имеют форму плоскихдисковдиаметром (2 — 4) мм
белого, желтого, кремового, лимонного, золотистого цвета с ровными краями; вокруг колоний образуется
радужное кольцо и зона помутнения среды.
На молочно-солевом агаре колонии коагулазоположительных стафилококков растут в виде непро
зрачных. круглых колоний, окрашенных от белого до оранжевого цвета, диаметром (2 — 4) мм. слегка
выпуклых.
На среде Байрд-Паркера колонии коагулазоположительных стафилококков растут в виде черных,
блестящих, выпуклых колоний диаметром (1 — 1.5) мм. окруженных зоной просветления среды шириной (1
— 3) мм.
С каждой чашки Петри отбирают не менее 5 характерных и/или сомнительных колоний коагулазо
положительных стафилококков (в случае роста менее пяти — все характерные колонии) и пересевают
7