ГОСТ 30347—2016
8.1.2.2 Посев
Навеску продукта или его разведения засевают по 1 см3в пробирки или колбочки с солевым
бульоном (6.2.3). Соотношение между количеством высеваемого продукта или его эквивалентным
разведением и питательной средой 1:10.
Пробирки и колбочки с посевами выдерживают в термостате при температуре (37 ± 1) °С в течение
(24 — 48) ч. Предположительное присутствие коагулаэоположительных стафилококков определяется
по помутнению среды.
Для подтверждения принадлежности микроорганизмов, выросших на солевом бульоне к коагула-
зололожительиым стафилококкам, для получения изолированных колоний делают пересев петлей из
бульона на чашки Петри с подсушенными средами типа Байрд-Паркер (6.2.5), желточно-солевого агара
(6.2.2) или молочно-солевого агара (6.2.4) по прошествии 24 ч инкубирования из предположительно
положительных пробирок; все оставшиеся пробирки — после 48 ч.
Чашки с посевами выдерживают в термостате при температуре (37 ± 1) °С в течение (24 — 48) ч.
После термостатирования посевы просматривают и отмечают рост характерных колоний.
На желточно-солевом агаре колонии коагулаэоположительных стафилококков имеют форму пло
скихдисков диаметром (2 — 4) мм белого, желтого, кремового, лимонного, золотистого цвета с ровными
краями; вокруг колоний образуется радужное кольцо и зона помутнения среды.
На молочно-солевом агаре колонии коагулаэоположительных стафилококков растут в виде непро
зрачных круглых колоний, окрашенных от белого до оранжевого цвета, диаметром (2 — 4) мм. слегка
выпуклых.
На среде Байрд-Паркера колонии коагулазоположительных стафилококков растут в виде черных,
блестящих, выпуклых колонийдиаметром (1 — 1.5) мм. окруженных зоной просветления среды шириной
(1 — 3) мм.
8.1.3 Подтверждение принадлежности типичных и атипичных колоний
Для подтверждения принадлежности типичных и атипичных колоний к коагулазоположительным
стафилококкам отбирают не менее пяти типичных и/или атипичных колоний с каждой чашки Петри. Для
подтверждения принадлежности отобранных типичных и атипичных колоний к коагулазоположительным
стафилококкам пересевают каждую отобранную колонию отдельно на поверхность скошенного пита
тельного агара по 6.2.6.
Посевы инкубируют при температуре (37 ± 1) °С в течение (24 ± 3) ч.
Для подтверждения принадлежности к коагулазоположительным стафилококкам у выросших и
отобранных микроорганизмовопределяют отношение к окраске по Граму— по ГОСТ 32901; способность
образовывать каталазу и способность коагулировать плазму крови кролика.
8.1.3.1 Коагулазоположительные стафилококки окрашиваются по Граму положительно (в темно-
фиолетовый цвет), имеют шарообразную форму и располагаются чаще (но не всегда) в виде скоплений,
напоминающих гроздья винограда.
8.1.3.2 Определение способности микроорганизмов образовывать каталазу
На колонию микроорганизмов, взятую с поверхности питательной среды или извлеченную из нее.
помещенную на предметное стекло и выдержанную на воздухе в течение 30 мин. пипеткой наносят
каплю 3 %-ного раствора перекиси водорода (6.2.14). Если через (30 — 60) с на стекле появляются
пузырьки газа, тосчитают, чтоони образовались в результате разложения перекиси водорода каталазой,
образуемой микроорганизмами.
Коагулазоположительные стафилококки образуют каталазу.
8.1.3.3 Определение способности коагулировать плазму крови кролика
Способностькоагулировать плазму крови кролика определяют у микроорганизмов, окрашивающихся
положительно и образующих каталазу.
В пробирку с 0.5 см3 разведенной кроличьей плазмы (6.2.9) вносят петлю суточной агаровой
культуры и тщательно перемешивают. Одну пробирку с плазмой оставляют незасеянной, а в другую
засевают контрольный штамм S. aureus (коагулазоположительный стафилококк). Пробирки помещают в
термостат и выдерживают при температуре (37 ± 1) X в течение (3 — 6) ч. Если по истечении 6 ч
коагуляции плазмы не произошло, то пробирки оставляют в термостате до 24 ч. Если через 24 ч плазма не
свернулась, то испытуемую культуру стафилококка относят к коагулазоотрицательной.
При определении коагулазной активности реакцию считают отрицательной, если в плазме не
образуются отдельные нити или сгустки или если в плазме появились отдельные нити (реакцию плаз-
мокоагуляции оценивают на один плюс).
6