ГОСТ ISO 20838—2014
Качественный результатдолжен четко демонстрировать наличие или отсутствие по сравнению с
соответствующими методами контроля и в пределах обнаружения используемого аналитического
метода и анализа проб.
Анализ состоит из:
a) амплификации PCR специфических целевых последовательностей:
b
) детекции продуктов PCR;
c) подтверждения идентичности продукта PCR.
d) подтверждения стандартизированным микробиологическим методом исследования (напри
мер. международный стандарт).
5 Реактивы
Используютаналитически чистые реактивы, подходящиедля молекулярныхбиологическихиссле
дований. Рекомендуетсябратьаликвоты реакционных смесей, требуемыхдля метода PCRи хранить их
при соответствующихусловиях, например, при минус20 °С.
5.1 ДНК-полимеразы
Для PCR используют теплоустойчивые полимеразы (включая деятельность обратной транскрип
тазы). Этомогутбытьочищенный.природныйфермент, илиочищенные, генетическиспроектированные
рекомбинантные формы фермента.
Используют согласно инструкциям производителя.
Каждая ДНК-полимераза может требовать различных экспериментальных условий, например,
буфер, температуру.
5.2 Обратная транскриптаза
Фермент используют для транскрипции РНК (рибонуклеиновая кислота) в комплементарной
одноцепочнойДНК (кДНК). ферментдолжен усиливаться последующей PCR.
Фермент используютсогласно инструкциям производителя.
5.3 Буфер реакции
Соответствующий буфериспользуютсогласно инструкциям производителя ферментов. Материа
лы. используемые для подготовки буфера PCR. должны быть устойчивыми относительно условий
хранения и переработки.
Используют согласно инструкциям производителя.
5.4 Дезоксирибонуклеозидтрифосфат^ИТр) для PCR
Растворы, содержащие молекулярныебиологические классыdATP, dCTP. dGTP, dTTP и/или dUTP
должны бытьиспользованы по необходимости. Растворы недолжны менятьсвойств во времяхранения и
при условиях PCR.
5.5 Праймеры
Праймеры должны быть выбраны на основе последовательности специально для обнаружения
ДНК целевого микроорганизма.
5.6 Вода
Вода для амплификации недолжна содержатьДНКазы и РНКазы. Подходиточищенная вода.
5.7 Хлорид магния (MgCI2)
Хлорид магния применяется как компонентбуфера реакции или какотдельный раствор.
5.8 Реактивы для обнаружения продуктов PCR
Реактивы, используемыедлясистемыобнаружения, описанной вметодеPCR. должны иметь соот
ветствующее качество.
5.9 Дополнительные реагенты
5.9.1 Минеральное масло
Распределяетсянареакционную смесьдля минимизациииспарениявовремятермического цикла.
5.9.2 Фасилитаторы
Вещества, такие какполиэтилен-гликоль или бычий сывороточный альбумин, которые могут быть
добавлены креакцииPCRдляснижения ингибирования реакции веществами, полученнымиизматрицы.
2