ГОСТ ISO/TS 22964—2013
Дают сухой пробе раствориться в жидкости без перемешивания. Если спустя 30 мин проба пол
ностью не растворилась, аккуратно перемешивают ее с питательной средой.
9.2 Предварительное обогащение
Ииокулированную среду для предварительного обогащения (см. 9.1) инкубируют при температуре
(37 ± 1) °С в течение (18 ± 2) ч.
9.3 Селективное обогащение
После инкубации инокулированной среды для предварительного обогащения переносят 0.1 см3
полученной культуры (см. 9.2) в 10 см3mLST/ванкомициновой питательной среды (см. 5.2.2.3). Инкуби
руют при температуре (44 ± 0,5) °С в течение (24 ± 2) ч.
Рекомендуется использовать водяную баню (см. 6.3) или термостат с принудительной вентиляцией,
чтобы гарантировать, что максимальный температурный порог в 44.5 °С не будет превышен.
9.4 Выделение презумптивных колоний
Enterobacter sakazakii
Из посевов после инкубации инокулированной mLSr/ванкомициновой питательной среды (см. 9.3)
с помощью петли делают пересев штрихом аликвоты (около 10 мм3) на поверхности чашки Петри с
селективным агаром для
Enterobactersakazakii
(см. 5.2.3.2). Инкубируют при температуре (44 ± 1) °С в
течение (24 ± 2) ч.
После инкубации исследуют чашку с хромогенной средой на наличие типичных колоний презум
птивных бактерий
Enterobactersakazakii.
П р и м е ч а н и е — Типичные колонии имеют размер от 1до 3 мм иокрашены в зеленый или сине-зеленый
цвет. Нетипичные колонии часто слегка прозрачны и окрашены в фиолетовый цвет.
9.5 Подтверждение
9.5.1 Образованно желтого пигмента
9.5.1.1 Выбор колоний
Выбирают от одной до пяти типичных колоний презумптивных бактерий
Enterobactersakazakii
на
исследованной инкубированной чашке с хромогенной средой (см. 9.4).
9.5.1.2 Инкубация
Делают посев выбранных колоний (9.5.1.1) на поверхность чашек с
TSA
(см. 5.2.4.2) таким образом,
чтобы после инкубации можно было наблюдать изолированные колонии. Инкубируют чашку при тем
пературе (25 ± 1) °С в течение 44—48 ч. После инкубации исследуют чашки с
TSA
на наличие колоний,
содержащих желтые пигменты.
Если была выбрана только одна колония (см. 9.5.1.1) и ее пересеяли в чашку с
TSA.
а после
инкубации не наблюдалось наличие колоний, содержащих желтый пигмент, то выбирают еще четыре
типичные колонии (см. 9.5.1.1) и повторяют действия согласно 9.5.1.2 сначала. При наличии менее 5
типичных колоний следует выбрать все.
ПРЕДОСТЕРЕЖЕНИЕ — Некоторые редкие штаммы
Enterobacter sakazakii
необразуют желтый пигмент
при условиях испытаний, описанных в настоящем стандарте, или пигмент может быть потерян в результате
пересевов.Таким образом, подобные штаммы могут быть не распознаны как штаммы
Enterobacter sakazakii
при использовании данного метода.
9.5.2 Биохимическое подтверждение
9.5.2.1 Общие положения
Могут быть применены тест-системыдля биохимической идентификации, которые вданный момент
доступны в продаже и позволяют определить бактерии вида
Enterobacter sakazakii.
3.5.2.2 Выбор колоний
Для дальнейшего биохимического анализа согласно 9.5.2.3 — 9.5.2.8 выбирают одну колонию,
содержащую желтый пигмент, из каждой чашки с триптон-соевым агаром (см. 9.5.1.2).
9.5.2.3 Оксидаза
Используя стеклянную палочку или одноразовую иглу для посевов, отбирают часть из каждой
выбранной характерной колонии (см. 9.5.2.2).
Наносят штрихи на фильтровальную бумагу, смоченную реактивом для определения оксидазы
(см. 5.2.5.1). или на имеющийся в продаже диск. Не допускается использовать петлю или иглу, изготов
ленную из никеля/хрома.
7