ГОСТ 17405—2016
0,2 см3 комплемента, разведенного в соотношении 1:20. В приведенной таблице 2 титр гемолитической
сыворотки равен 1:1500.
Рабочий титр гемолитической сыворотки для реакции связывания комплемента (РСК) составляет
удвоенное значение титра. Так если титр гемолитической сыворотки равен 1:1500, то рабочий титр
будет 1:750.
6.5.2.6 Титрование комплемента
Комплемент титруют в гемолитической системе. Титром считают его наименьшее количество, не
обходимое для полного гемолиза 0,5 см3 2,5 %-ной взвеси эритроцитов барана при установленной по
6.5.2.5 дозе гемолитической сыворотки в течение 10 мин в водяной бане при температуре 37 °С — 38 °С.
Рабочим титром комплемента считают его количество на два интервала больше титра (например, при
титре 0,19 рабочий титр будет 0,25).
Количество неразведенного комплемента X, необходимое для постановки реакции связывания
комплемента (РСК), рассчитывают по формуле
РТП
(
1
)
20
где РТ — рабочий титр комплемента;
П — число пробирок в опыте;
20 — разведение комплемента при титровании.
Для постановки РСК рассчитанное количество комплемента разбавляют в 0,9 %-ном изотониче
ском растворе хлорида натрия до объема:
^комплемента^^,5,(2)
где 0,5 — объем комплемента в рабочем титре в одной пробирке, см3.
6.5.3 Проведение испытания
Для проведения испытания применяют реакцию связывания комплемента (РСК). РСК ставят в
общем объеме 2,5 см3. Каждого ингредиента берут по 0,5 см3 в установленном рабочем титре.
Разведения антигена, сывороток и комплемента разливают в указанной последовательности в
пробирки и одновременно ставят контрольные пробирки в соответствии с таблицей 4. В контрольные
пробирки вместо недостающих компонентов вносят 0,9 %-ный изотонический раствор хлорида натрия по
0,5 см3.
Т а б л и ц а 4 — Схема и результаты постановки РСК (пример)
Разведение антигенаКонтроль
Разведение сывороток
1:501:1001:2001:300
Контрольная
1:400серия анти
гена 1:100
Без анти
гена
Без антигена
и компле
мента
Негативная сыворотка
1:51001001001001001001000
Контрольная
сыворотка
сапная
1:100000001000
1:20100002001000
1:402000104001000
1:804000309001000
1:16060403060100301000
Кон- Без сыворотки
100 100 100 100 100 100 100 0
троль
Без сыворотки и ком
0 0 0 0 0 0 0 0
племента
П р и м е ч а н и е — В настоящей таблице приведены примеры значения степени задержки гемолиза эри
троцитов в процентах.
Штативы с пробирками встряхивают и выдерживают 20 мин в водяной бане при температуре
(37 ± 1) °С. Затем во все пробирки вносят гемолитическую систему по 1 см3 и снова помещают в во
дяную баню на 20 мин. Реакцию учитывают визуально через 16— 18 ч после выдерживания при
темпе ратуре от 4 °С до 12 °С.
7