ГОСТ 17405—2016
6.5.2Подготовка к испытанию
6.5.2.1 Приготовление 0,9 %-ного изотонического раствора хлорида натрия
9 г хлорида натрия по ГОСТ 4233 растворяют в 1 дм3дистиллированной воды или воды для инъ
екций. Раствор фильтруют, разливают в стеклянные флаконы по 250 см3 и стерилизуют при темпера
туре от 110 °С до 120 °С в течение 15—20 мин или текучим паром при температуре 100 °С в течение
30 мин. Раствор хранят при температуре от 2 °С до 8 °С в течение года.
6.5.2.2 Приготовление разведений антигена
Готовят разведения испытуемого антигена в 0,9 %-ном изотоническом растворе хлорида натрия в
соотношении: 1:50, 1:100, 1:200, 1:300, 1:400 и контрольного антигена в соотношении 1:100.
6.5.2.3 Приготовление разведений контрольной сапной сыворотки и негативной сыворотки
Готовят разведения контрольной сапной сыворотки в 0,9 %-ном изотоническом растворе хлорида
натрия в соотношении: 1:10, 1:20, 1:40, 1:80, 1:160 и негативной сыворотки в соотношении 1:5. Готовые
разведения инактивируют в водяной бане при температуре от 58 °С до 59 °С в течение 30 мин.
6.5.2.4 Приготовление эритроцитов барана
Эритроциты барана (являющиеся антигеном в гемолитической системе) отмывают от других фор
менных элементов крови 0,9 %-ным изотоническим раствором хлорида натрия, приготовленного по
6.5.2.1 путем 3—4-кратного центрифугирования при скорости вращения ротора 2500—3000 об/мин до
полного обесцвечивания промывной жидкости, но не более четырех раз. Из осадка эритроцитов готовят
2,5 %-ную взвесь в 0,9 %-ном изотоническом растворе хлорида натрия.
6.5.2.5 Определение титра гемолитической сыворотки
Гемолитическую сыворотку по ГОСТ 16445 титруют в разведениях: 1:500, 1:750, 1:1000, 1:1250,
1:1500, 1:1750 и 1:2000 по схеме, приведенной в таблице 2.
Т а б л и ц а2 — Схема титрования гемолитической сыворотки
Разведение гемолитической сыворотки
Компонент
1:500
1:7501:10001:12501:15001:17501:2000
Гемолитическая сыворотка0,20,20,20,2
Комплемент в разведении 1:200,20,20,20,2
Эритроциты барана (2,5 %-ная взвесь)0,20,20,20,2
0,9 %-ный изотонический раствор хлорида натрия0,40,40,40,4
0,20,20,2
0,20,20,2
0,20,20,2
0,40,40,4
Водяная баня 10 мин при
37 °С
—
38 °С
Результат (пример)ПГПГПГПГПГЧГЧГ
П р и м е ч а н и е — ПГ-полный гемолиз; ЧГ-частичный гемолиз.
Разведения гемолитической сыворотки готовят из исходного 1:100 (0,1 см3гемолитической сыворот
ки смешивают с 9,9 см3 изотонического раствора хлорида натрия) по схеме, приведенной в таблице 3.
Т а б л и ц а 3
Основное разведение гемолитической
сыворотки 1:100, см3
0,9 %-ный изотонический раствор
хлорида натрия, см3
Разведение
0,2
0,8
1:500
0,2
1,3
1:750
0,2
1,8
1:1000
0,2
2,3
1:1250
0,2
2,8
1:1500
0,2
3,3
1:1750
0,2
3,8
1:2000
Титром сыворотки считают наименьшее ее количество (наибольшее разведение), необходимое
для полного гемолиза в течение 10 мин 0,2 см3 2,5 %-ной взвеси эритроцитов барана в присутствии
6