ГОСТ 33835—2016
6.3 Подготовка к определению концентрированных фруктовых и овощных соков
и концентрированной соковой продукции
Концентрированную соковую продукцию разбавляют дистиллированной водой до содержания
растворимых сухих веществ, соответствующего требованиям [1]. Массовуюдолю растворимыхсухих
веществ определяют по ГОСТ ISO2173. Вслучае высокой массовой концентрации лимонной кислоты
пробу разводят повторно в соответствии с 6.2.
7 Приготовление растворов
7.1 Приготовление буферного раствора 7,8 ед. pH
В мерную колбу вместимостью 100 см3помещают 7,13 г глицилглицина. растворяют в 70 см3
дистиллированной воды и доводят pH раствора до 7.8 ед. pH. используя приблизительно 13 см3
раствора гидроокиси натрия концентрации 5 моль/дм3, затем приливают 10 см3раствора хлористого
цинка массовой концентрацией 800 мг/дм3и объем доводят дистиллированной водой до метки.
Буферный раствор устойчив при температуре 4 °С в течение четырех недель при хранении в
холодильнике.
7.2 Приготовление раствора НАДН
Для приготовления раствора 30 мг динатриевой соли НАДН и 60 мгдвууглекислого натрия рас
творяют в пробирке вместимостью 10 см3по ГОСТ 1770 в 6 см3дистиллированной воды.
Раствор устойчив при температуре4 X в течение четырех недель прихранении в холодильнике.
7.3 Приготовление смеси ферментов МДГ/ЛДГ
Для приготовления смеси ферментов0,1 см3суспензии МДГ и0,5 см3 суспензии ЛДГсмешивают
в пробирке вместимостью 5 см3по ГОСТ 1770 с 0,4 см3раствора сернокислого аммония.
Суспензия МДГ/ЛДГ в растворе сульфата аммония устойчива при температуре 4 X в течение
одного года при хранении в холодильнике.
7.4 Приготовление раствора ЦЛ
Для приготовления раствора 168 мглиофилизата ЦЛ растворяют в 1см3охлажденнойдо темпе
ратуры 1 С— 2 Сдистиллированной воды (температуру контролируют термометром поГОСТ 28498) в
пробирке вместимостью 5 см3по ГОСТ 1770. Активность фермента в полученном растворе будет
составлять 1,25 Е/см3.
Раствор хранят в холодильнике при температуре 4 X в течение одной недели или не более
четырех недель в замороженном состоянии при температуре не выше минус 18 X .
8 Проведение определения
8.1 Определение проводят при температуре от 20 X до 25 X и относительной влажности
50 % — 55 %. Если обеспечивается достижение результатов, эквивалентных указанному выше тем
пературному интервалу, допускается определение при постоянной выбранной температуре в интер
вале от 25 X до 37 X . Для дозирования определяемой пробы и растворов используют пипетки с
делениями или пипеточныедозаторы. Растворы ферментов, кофермонтов ибуфера вносят в кюветы
соответствующими пипеточными дозаторами.
При использовании спектрофотометра с изменяемойдлиной волны, измерения проводят толь
ко при длине волны 340 нм, при которой восстановленная форма НАДН показывает максимальный
уровень поглощения. При использовании ртутной лампы проводят измерение спектра при длине
волны 334 или 365 нм.
Пробы анализируют два раза в условиях повторяемости в соответствии с требованиями
ГОСТ ИСО 5725-1 (подраздел 3.14).
8.2 В кювету спектрофотометра (фотометра) вносят 1.00см3буферного раствора 7.8 ед.pH. 0.1 см3
раствора НАДН, 0,20 см3раствора анализируемой пробы. 1.80 см3дистиллированной воды и 0.02см3
смеси ферментов МДГ/ЛДГ. Инкубационную смесь перемешивают, выдерживают в течение 5 мин
и измеряют в спектрофотометре (фотометре) начальную оптическую плотность раствора (А^ ро6а
относительно воздуха.
При высоких значениях начальной оптической плотности (более 1,000) готовят новую пробу,
используя 0.05 см3раствора НАДН. В этом случае рекомендуется также уменьшить объем раствора
4