ГОСТ 33615—2015
9 Проведение иммуноферментного анализа
9.1 Общие положения
9.1.1 При проведении испытаний следует использовать реагенты и компоненты, входящие водин
и тот же набор (тест-систему). Разбавление или замена реагентов из набора (тест-системы) другой
серии недопускается.
9.1.2 Наборы (тест-системы) следует хранить при температуре от 2 °С до 8 °С в пределах срока
хранения.
9.1.3 Окрашивание раствора субстрата No 5 (см. приложение А) является признаком его порчи
и делает невозможным его применениедля анализа.
9.2 Подготовка тест-системы к проведению анализа
9.2.1 Перед использованием тест-систему вынимают из холодильника и выдерживают при
комнатной температуре не менее 30 мин. после чего аккуратно встряхивают каждый флакон. Реактив No
3 (см. приложение А) необходимо прогреть в термостате при температуре 37 °С до полного раство рения
кристалловсолей итщательно перемешать.
9.2.2 После использования реагенты тест-системы сразуубирают в холодильник.
9.2.3 На всехстадиях необходимо избегать воздействия прямогосолнечного света.
9.2.4 Для каждого реактива и раствора используют отдельные съемные наконечники пипеток
переменной вместимости. Внесение растворов в лунки проводятосторожно, не касаясь наконечниками
ихдна истенок.
9.2.5 Каждый исследуемый раствор экстрактов испытуемых проб (см. 8.4) и градуировочных рас
творов (см. 8 2.4.2) анализируют в двух повторностях.
П р и м е ч а н и е — Далее приведены расходы реактивов на два стрипаЧ что достаточно для анализа трех
исследуемых проб. Для другого числа проб количество используемых стрипов и смешиваемых объемов реагентов
изменяют в соответствии с количеством исследуемых проб.
9.3 Проведение анализа
9.3.1 Из планшета извлекают необходимое число стрипов. Неиспользованные стрипы хранят
в закрытом фольгированном полиэтиленовом пакете с зип-локом2’ при температуре от 2 вС до 8 *С
в течение всего срока годности тест-системы.
9.3.2 В лунки планшета вносят по 0.05 см3экстрактов рабочих градуировочных растворов К,—Ks
(см. 8.2.4.2) и растворов испытуемых проб.
Каждый раствор вносятвдвойной повторности (лунки-дубли).
Внесение растворов проводятсогласно приложению Б.
Далее в каждую лунку вносят по 0.05 см3рабочего раствора ферментного конъюгата (см. 8.2.8).
Стрипы заклеиваютпленкой или закрываюткрышкой, инкубируют втермостате при температуреот2 5С
до 8 °С в течение 1ч, после чего содержимое луноксливают.
9.3.3 В лунки планшета вносят по 0.2 см3раствора буфера для промывки (см. 8.2.5). оставляют
на 1—2 мин и сливают. Процедуру промывки повторяют еще три раза. Остатки жидкости интенсивно
стряхивают на чистую фильтровальную бумагу.
9.3.4 В лунки планшета вносят по 0.1 см3раствора N&5 (см. приложение А) и инкубируют в тер
мостатепри температуре37 °Свтечение 10мин.Добавляютпо0.1 см3раствора N96 (см.приложениеА),
аккуратно перемешивают легким постукиванием по ребру планшета. Помещают планшет в верти
кальный фотометр иизмеряют значенияОП при длине волны 450 нм.
10 Обработка результатов измерения
10.1По показателям ОП в лунках-дублях находят среднеарифметические значения. Разность
значений ОП для нихв процентахот среднего недолжна превышать 10.
Стрип — полоска из восьми лунок.
21 Зип-лок — замок, обеспечивающий герметизацию пакета.
7