ГОСТ 33568—2015
Натрия гидроокись по ГОСТ 4328. растворы массовой долей от 20 % до 30 %.
Кислота молочная по ГОСТ 490. раствор объемной долей 20 %.
Натрий хлористый по ГОСТ 4233.
Водорода перекись по ГОСТ 177.
Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей по ГОСТ 13805.
Автолизат дрожжевой сухой, массовой долей общего азота не менее 7.0 % и массовой долей
аминного азота не менее 5.0 %.
Молоко гидролиэованное сухое, массовой долей общего азота не менее 5.5 % и массовой долей
аминного азота не менее 2.5 %.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709. соответствующая требованиям ГОСТ ИСО 11133-1
(подпункт 4.3.2).
Молоко коровье обезжиренное — сырье по ГОСТ 31658.
Допускается применение других средств измерения, вспомогательного оборудования, не
уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающих
необходимую точность измерения, а также реактивов и материалов по качеству не хуже
вышеуказанных.
5.3 Подготовка к анализу
5.3.1Приготовлениепитательнойсредыдляопределениясолеустойчивых
микроорганизмов
В качестве плотной питательной среды для выявления солеустойчивых микроорганизмов в
молоке и молочной продукции используется молочно-солевой агар, состоящий из сухой питательной
основы и обезжиренного молока.
5.3.1.1 Приготовление основы питательной среды
115.0 г сухой основы, включающей 23.0 г сухого гидролизованного молока либо сухого пептона.
75,0 г хлористого натрия. 2.0 сухого дрожжевого автолизата и 15,0 г агара, вносят в 1 дм3
дистиллированной воды. Смесь тщательно перемешивают, кипятят 3—5 мин до полного
расплавления агара, не допуская пригорания. В полученной среде проверяют активную кислотность
и. при необходимости, корректируют ее раствором гидроокиси натрия массовой долей от 20 % до 30
% или раствором молочной кислоты объемной долей 20 % до уровня (7,2
±
0.1) ед. pH. Среду
разливают в колбы, закрывают ватными пробками и стерилизуют при температуре (121
±
2) еС в
течение (20
±
1) мин. Объем подготовленной основы питательной среды фиксируют для расчета дозы
внесения стерильного обезжиренного молока.
5.3.1.2 Приготовление стерильного обезжиренного молока
Обезжиренное молоко разливают в пробирки или колбы (возможно использование 10 %
восстановленного обезжиренного молока), закрывают ватными пробками и стерилизуют при
температуре (121
±
2) вС в течение (11
±
1) мин.
5.4 Проведение анализа
5.4.1 Определение общего количества солеустойчивых микроорганизмов
Перед посевом основу питательной среды, подготовленную по 5.3.1.1, расплавляют на водяной
бане либо в автоклаве в текучем паре в течение 20—25 мин и охлаждают до (45
±
1) °С. К основе
добавляют 10 % (по объему) стерильного обезжиренного молока, подготовленного по 5.3.1.2. хорошо
перемешивают, соблюдая стерильность, разливают по 15—20 см3 в чашки Петри и ставят для
застывания на горизонтальную поверхность. Застывшую среду подсушивают, так как ее влажная
поверхность способствует слиянию колоний. Подсушивать среду в чашках Петри рекомендуется в
термостате при температуре от 37 °С до 45 °С. расположив открытые чашки на стерильной бумаге в
перевернутом виде. Время подсушивания1 ч. Допускается проводить подсушивание в боксе на
столе при включенных бактерицидных лампах.
Срок хранения чашек с подготовленной средой, завернутых в стерильную бумагу, в
холодильнике — не более 5 сут.
Объем (массу) засеваемого подукта или его разведения определяют исходя из предполагаемой
обсеменонности солеустойчивыми микроорганизмами. После тщательного перемешивания посевной
материал, отобранный стерильной пипеткой в количестве 0.1; 0.2 или 0.5 см3, наносят на поверхность
плотной питательной среды, обеспечивая тем самым аэробные условия для развития микроорганизмов.
Профламбированным шпателем Дригальсхого посевной материал равномерно растирают по поверхности
питательной среды.
Чашки Петри переворачивают крышками вниз и ставят в термостат с температурой (37 ♦ 1) °С
на 48—72 ч.
Картина роста солеустойчивых микроорганизмов представлена в приложении А.
4