ГОСТ 33459-2015
7.6 Определение стерильности живых вакцин или наличия контаминации микробной и
грибной микрофлорой инактивированных вакцин
Стерильность живых вакцин или наличие бактериальной и грибной контаминации в инактивиро
ванных вакцинах проверяют согласно ГОСТ 28085.
7.7 Определение общей концентрации микроконидий или грибных элементов (для инакти
вированных вакцин)
7.7.1 Проведение испытания
Общую концентрацию микроконидий (общую концентрацию элементов грибов) определяют в трех
флаконах (ампулах) с вакциной путем подсчета их в камере Горяева. Подсчет проводят в вакцине без
разведения, либо разводят стерильно из расчета одна доза в 5-10 см3 разбавителя или дистиллиро
ванной воды для удобства подсчета с соответствующим пересчетом.
После тщательного перемешивания вакцину набирают пипеткой Пастера и заполняют обе
сетки камеры Горяева. Подсчет проводят в пяти больших квадратах каждой сетки камеры: четы
рех угловых и центральном. Количество микроконидий (элементов грибов) определяют в двух
сетках камеры. Если между значениями, полученными в обеих сетках, наблюдается разница бо
лее чем 30 микроконидий (элементов грибов), то вновь заполняют камеру и проводят повторный
подсчет.
П р и м е ч а н и е - При подсчете микроконидий фрагменты мицелия не учитывают.
7.7.2 Учет результатов
Общую концентрацию микроконидий (элементов грибов) X. млн/см3, подсчитывают по формуле
X
к,
О)
гдех - среднеарифметическое число микроконидий по двум сеткам камеры Горяева, шт.;
0,02 - объем заполнения камеры Горяева, мм3:
103- пересчет объема вакцины на 1 см3,
к - коэффициент, учитывающий степень разведения вакцины.
За результат принимают среднеарифметическое значение, полученное по трем флаконам (ампу
лам) с вакциной.
7.8 Определение концентрации жизнеспособных микроконидий
7.8.1 Проведение испытаний
Концентрацию жизнеспособных микроконидий определяют в трех флаконах (ампулах) с вакциной.
При проверке количества жизнеспособных микроконидий используют вакцину, подготовленную по 7.7.1.
Испытания проводят через 30-40 мин после ресуслензирования.
На каждый флакон (ампулу) берут пять пробирок, в каждую из которых бюреткой или пипеткой
вносят по 4,5 см3 разбавителя или 0.9 %-ного раствора натрия хлорида. Содержимое флакона (ампу
лы) с ресуспензированной вакциной тщательно перемешивают встряхиванием, затем новой
пипеткой отбирают 0,5 см3взвоси и переносят в первую пробирку, затем таким же образом во вторую
и т. д., т. е. готовят ряд последовательных разведений от 10-1до 10 5. Из пятой пробирки пипеткой
отбирают 1.0 см3 взвеси и засевают в две чашки Петри с сусло-агаром по 0.5 см3 в каждую. Посев
из каждого флакона делают в трех повторностях, то есть по шесть чашек Петри на каждый флакон.
Легким покачиванием чашек Петри засеянную дозу вакцины распределяют равномерно по
поверхности питательной среды. Засеянные чашки помещают в термостат при температуре (26 ± 1)
°С на 7 - 12 сут и подсчитывают количество выросших колоний.
8