ГОСТ 33275—2015
7.11 Определение инфекционной активности
7.11.1 Определение инфекционной активности на куриных эмбрионах
7.11.1.1 Подготовка киспытанию
Вакцину из трех флаконов (ампул) ресуспензируют по7.6.1. содержимое объединяют. Из объеди
ненной пробы готовят десятикратныеразведения вакцины от 10-1до 10-6,длячегоберутшесть пеницил
линовых флаконов или пробирок, в каждый (ую) из которых пипеткой вносят по 4.5 см3 0.9 %-ного
раствора натрия хлорида изотонического. Содержимое флакона (пробирки) с ресуспензированной
вакциной тщательно перемешивают встряхиванием, затем другой пипеткой отбирают 0.5 см3вакцины,
переносят в первую пробирку и перемешивают, затем из первой пробирки берут 0.5 см3 полученной
взвеси и переносят во вторую пробирку ит. д.
7.11.1.2 Проведение испытания
Инфекционную активность вакцины оценивают на СПФ-эмбрионах. Для испытания каждого разве
дения вакцины используют неменее пяти эмбрионовине менеедвухэмбрионов используют для контро
ля. Заражение эмбрионов проводят на ХАО вискусственно созданную (боковую) воздушную камеру.
Для этого эмбрионы овоскопируют и отмечают на скорлупе графитным карандашом границу воз
душной камеры ибессосудистый участокХАО сбоковой стороны эмбриона. Скорлупу эмбриона обраба
тывают антисептическим раствором. В скорлупе образуют два отверстия диаметром 1—2 мм в
отмеченных участках: одно — со стороны естественной воздушной камеры, другое — сбоку (не
повреждая при этом целостность ХАО). Эмбрионам придают горизонтальное положение, обращая второе
отверстие вверх. Через первое отверстие вестественной воздушной камере эмбриона кратков ременно
создают отрицательное давление (отбирая резиновой грушей около 0.2 см3 воздуха), что в свою
очередь приводит к проникновению воздуха через второе отверстие, отслаиванию ХАО от скор лупы и
образованию искусственной воздушной камеры. Далее вискусственную воздушную камеру вво дят
инъекционную иглу (на глубину не более 2—3 мм) и вносят определенное разведение вакцины в объеме
0.2 см3. После этого оба отверстия в скорлупе заливают стерильным расплавленным парафи ном.
Инфицированные эмбрионы втечение 24 ч сохраняют вгоризонтальном положении.
Аналогичную операцию проводят ивконтрольнойгруппе эмбрионов, где вместоразведения вакци
нывискусственнуювоздушную камерунаХАО вносят 0.9 %-ный растворнатрия хлорида изотонического
вобъеме 0.2 см3.
Инфицированные и контрольные эмбрионы инкубируют при температуре (37.0 * 0.5) °С и относи
тельной влажности воздуха 60 %—70 % втечение семи суток, ежедневно овоскопируя.
Эмбрионы, погибшие впервые 36 ч после заражения, считают неспецифически павшими иисклю
чают из дальнейшей работы. Овоскопию эмбрионов, инкубируемых свыше 36 ч, проводят ежедневно.
Во время просмотра оценивают степень развития инфекционного процесса, обусловленного вакцин
ным вирусом оспы птиц. Определяют изменения сосудистого русла иструктуры ХАО эмбриона (возник
новение характерных пятен или узелков, имеющих большую оптическую плотность сравнительно с
нормальной тканью ХАО). При необходимости картину воспалительного процесса ХАО на месте внесе
ния вируссодержащего материала сравнивают с контролем.
На седьмыесутки после заражения эмбрионы охлаждаютдотемпературы 2 °С—6 °С ипроводят их
вскрытие, делая отверстие в скорлупе со стороны острого конца яйца с целью обнаружения признаков
размножения вакцинного вируса оспы птиц вткани ХАО. Установленные у эмбриона (живого или погиб
шего) специфическиедля вируса оспы птиц поражения ХАО (локализованные на месте введения мате
риала или генерализованные) считают положительной реакцией.
7.11.1.3 Обработка результатов
Оценку величины инфекционной активности вируса оспы птиц для эмбрионов проводят пометоду
Кербера в модификации Ашмарина.
Предварительно вычисляют инфекционную активность для эмбрионоввдозедля инъекции 0.2 см3
|9ЭИД5ой2с-3 п°Ф°РмУле
‘9 ЭИД
5
»<и<»3 =lgD + d(2L ,-0.5).О)
где D — разведение вакцины, вызывающее 100 %-ное специфическое поражение ХАО;
d — логарифм кратности разведения:
L — отношение числа эмбрионов, погибших (пораженных) при заражении дозой D„, к общему чис
лу
зараженныхэтойдозой эмбрионов:
/ — порядковый номер разведения вакцины (минимальное разведение принимают за первое);
8