ГОСТ 32638—2014
ней мере в варианте с одной концентрацией вещества (наивысшей концентрацией, давшей положи
тельный эффект) и в культурах отрицательного и позитивного контроля. Молекулярная и
цитогенетическая природа мутантов, образующих большие и малые колонии, в деталях рассмотрена в
ряде работ [24.25]. В ТК+А тесте колонии подсчитывают, используя критерии нормального роста (боль
шие колонии) и медленного роста (малые колонии) [26]. Мутантные клетки, имеющие более тяжелые ге
нетические нарушения, имеют более длительное время удвоения и соответственно формируют
небольшие колонии. Спектр этих нарушений колеблется от полной потери генадо кариотипически выяв
ляемых хромосомных аберраций. Образование малых колоний связано с химическими веществами, ин
дуцирующими «большие» хромосомные аберрации [27]. Мутантные клетки с менее серьезными
нарушениями растутсо скоростью, сходной с родительскими клетками, иформируют большие колонии.
Должны быть представлены выживаемость (относительная эффективность клонирования) и отно
сительный общий рост. Частота мутаций приводится как число мутантных клеток на общее число выжив
ших клеток.
Данные приводят по отдельным культурам. Дополнительно все данные следует объединить (сум
мировать) в табличной форме.
Нет требований к верификации четко положительного ответа. Противоречивые результаты следу
ет прояснить, проводя дальнейшее тестирование, предпочтительно используя модифицированные экс
периментальные условия. Отрицательные результаты следует в отдельных случаях подтверждать. В
тех случаях, когда подтверждение отрицательных результатов не считается необходимым, правомер
ность этого должна быть обоснована. Модификация параметров исследования, степень колебания
условий могут быть проведены в последующих экспериментах при противоречивых или отрицательных
результатах. Параметры, которые могут быть модифицированы, включают диапазон концентраций и
условия метаболической активации.
5.2 Оценка и интерпретация результатов
Существует ряд критериев для определения положительного результата: зависимость от концен
трации или воспроизводимое повышение частоты мутаций. На первом месте должна быть биологичес
кая обоснованность результатов. Дополнительно при оценке результатов могут быть использованы
статистические методы. Статистическая значимость не должна быть единственным определяющим
фактором при оценке положительного ответа.
Исследуемое вещество, для которого все вышеприведенные критерии отрицательны, считается
немутагеном в данной тест-системе.
Хотя в большинстве исследований получают четкие положительные или отрицательные результа
ты. в редких случаяхданные не позволяют сделать заключение об активности вещества. Результаты мо
гут оставаться противоречивыми или сомнительными несмотря на то. что эксперименты несколько раз
повторены.
Положительные результаты в тесте оценки генных мутаций на клетках млекопитающих in vitro по
казывают. что исследуемое вещество индуцирует генные мутации в используемых культивируемых
клетках млекопитающих. Выявленная зависимость эффекта от концентрации, которая повторяется, на
иболее значима. Отрицательные результаты показывают, что при данных условиях исследуемое вещес
тво не индуцирует генных мутаций в используемых культивируемых клетках млекопитающих.
5.3 Отчет
Отчет должен включать следующую информацию.
Исследуемое соединение:
- идентификационные данные и номер CAS. если известен.
- физическую природу и чистоту;
- физико-химические параметры, имеющие значимость для данного исследования;
- стабильность веществ.
Растворителы’разбавитель:
- обоснование выбора растворителяУразбавителя;
- растворимость истабильность исследуемого вещества в растворителе/разбавителе. если из
вестны.
Клетки:
- тип и источник клеток;
- число клеточных культур;
- число пассажей, если используются;
5