ГОСТ 32713—2014
9Выполнение определений
Помещают в прибор пустую кювету или кювету с дистиллированной водой. Устанавливают нуль.
Далее в кюветы с холостой пробой и пробой, подготовленной по 8.4. с помощью пипетки или дозатора
вносят раствор No 1. раствор No2. в количествах ив последовательности, указанных в таблице 1. затем в
кювету с холостой пробой вносят бидистиллированную воду, в кювету с пробой — соответственно 0,10
см3пробы, подготовленной по 8.4, и бидистиллированную воду.
Т а б л и ц а1
Наименование раствора
и лоряаок внесения растворов в кюветы
Кювета
с холостой пробой
Кювета с пробой,
подготовленной по 8.4
Раствор № 1, приготовленный по 8.3.1
Раствор NS 2. приготовленный по 8.3.2
Проба, подготовленная по 8.4
Бидистиллированная вода
Раствор Мг 3. приготовленный по 8.3.3
1.00 см3
0,10 см3
—
1.80 см3
0.05 см3
1.00 см3
0.10 см3
0.10 см3
1.70 см3
0.05 см3
Содержимое обеих кювет перемешивают пластиковыми шпателями или стеклянными палочками.
Через шесть минут измеряют оптическую плотность в кювете схолостой пробой Dи в кювете с пробой
продукта. 0)ирсоответственно. Затем в каждую кюветудобавляют раствор No3 в количестве, указанном в
таблице 1. Вновь перемешивают пластиковым шпателем или стеклянной палочкой. Помещают в при бор
кювету с воздухом или с дистиллированной водой. Через 20 мин измеряют оптическую плотность в
кювете с холостой пробой D2xp и с пробой продукта 02ирсоответственно. Выполняют два параллельных
определения.
П р и м е ч а н и е — Время, необходимое для протекания ферментативной реакции, может варьироваться.
Для установления времени протекания реакции рекомендуется перед каждой серией определений провести опре
деление в растворе с известной массовой концентрацией D-яблочиой кислоты.
10 Обработка результатов измерений
10.1 Массовую концентрацию D-яблочной кислоты С. г/дм3, вычисляют по формуле
■
F
г
_
М
У, ■
■
ДО
n -d -V 2
1000’
(D
где М — молярная масса О-яблочной кислоты, равная 134.09 г/моль:
V. — общий объем раствора в кювете, равный 2,95 см3 (см. таблицу 2);
F — коэффициент предварительного разбавления пробы;
дD — разность значений оптических плотностей, вычисляемая по формуле
ДО = (02и!) - 01|ф) - (02хр- D,xp).(2)
й
где 0 1ири 02
о
— значения оптической плотности раствора с пробой продукта до и после добавления
раствора No 3 в соответствии с разделом 9;
0 1хри 021ф— значения оптической плотности холостой пробы до и последобавления раствора № 3
в соответствии с разделом 9;
с— молярный коэффициент поглощения НАДН (дм3ммоль-1см-1):
- при 340 нм — 6,30,
- при 365 нм — 3.40,
- при 334 нм — 6.18;
d — толщина поглощающего свет слоя кюветы, равная 1см;
V2 — объем пробы продукта, равный 0,1 см3(см. таблицу 2);
1000 — коэффициент пересчета ммоль в моль.
Результат вычислений записывают до третьего десятичного знака. Окончательный результат вы
числений округляют до второго десятичного знака.
5