ГОСТ 32740—2014
ляя смывы в мерную колбу, и доводят объем до метки этим раствором.
4.6.13.3Параллельно готовят по 4.6.13.2 холостую пробу, в качестве которой используют 15 см
3
хлороформа, добавляемого в кварцевый стакан вместо раствора липидов в хлороформе.
4.6.14 Построение градуировочного графика
4.6.14.1 В мерные колбы вместимостью 50 см
3
вносят 1, 2. 3, 4, 5.
6
и 7 см
3
рабочего раствора
фосфора (см. 4.6.10) (соответственно 100. 200, 300,400, 500, 600 и 700 мкг фосфора).
4.6.14.2 В каждую колбу добавляют дистиллированную воду до объема 10 см3. 10 см
3
разбав
ленной серной кислоты (см. 4.6.2). 10 см
3
молибдем-ванадиевого реактива (см. 4.6.8), доводят объем
дистиллированной водой до метки и перемешивают. Выдерживают раствор в течение (30 ± 5) мин
при комнатной температуре 20 °С - 30 °С и измеряют его оптическую плотность
D
в кюветах с толщи
ной поглощающего 1 см на спектрофотометре при длине волны 436 нм или на фотоэлектроколори
метре с использованием светофильтра А**,. = (440
±
5) нм.
4.6.14.3 Параллельно измеряют оптическую плотность D1 контрольного раствора, приготовлен
ного по 4.6.14.2 без добавления рабочего раствора фосфора.
4.6.14.4 Градуировочный график строят, откладывая на оси абсцисс добавленные в колбы мас
сы фосфора, мкг (см. 4.6.14.1), на оси ординат - соответствующие им измеренные значения оптиче
ской плотности с поправкой на контрольный раствор (D-D1).
4.6.14.5 Анализ пробы и построение градуировочного графика проводят при одинаковых на
стройках спектрофотометра или фотоэлектроколориметра.
4.6.14.6 Контроль стабильности градуировочной зависимости проводят периодически, но не
реже одного раза в два месяца, а также при приготовлении новых растворов ванадиевокислого (рас
твор А, см. 4.6.6) и/или молибденовокислого аммония (раствор Б. см. 4.6.7). Контроль проводят по
свежеприготовленному градуировочному раствору (см. 4.6.14.1). содержащему 700 мкг фосфора, из
меряют оптическую плотность приготовленного раствора и по проверяемому градуировочному графи
ку определяют содержание фосфора. Если отклонение измеренного содержания фосфора от факти
ческого превышает
2
%, то строят новый градуировочный график.
4.7 Проведение измерения
4.7.1 В мерные колбы вместимостью 50 см
3
вносят аликвоты по 4 см
3
раствора минерализата
экстрагированных липидов и раствора холостой пробы, приготовленных соответственно по 4.6.13.2 и
4.6.13.3. Далее поступают по 4.6.14.2. По величине оптической плотности раствора минерализата
экстрагированных липидов с коррекцией на холостую пробу с помощью градуировочного графика (см.
4.6.14) находят массу фосфора
т.
содержащуюся в аликвотном объеме раствора минерализата экст
рагированных липидов.
4.7.2 Величина оптической плотности
D
при анализе раствора минерализата экстрагированных
липидов должна находиться в пределах 0,1-0.8. При необходимости увеличивают (не более чем до
8
см3) или уменьшают аликвотный объем раствора минерализата (см. 4.7.1) и/или увеличивают или
уменьшают массу пробы, взятой для анализа.
4.8 Обработка результатов
4.8.1Содержание липидного фосфора
X
в пересчете на сухое вещество, %о. вычисляют по
формуле
m-Vx-V%
100
.V3.V4.1000*
Р
’(1)
где
т -
масса липидного фосфора в аликвотном объеме раствора минерализата экстрагированных
липидов, определенная с помощью градуировочного графика по 4.6.14.4, мкг;
V
1
- общий объем смеси этанол-хлороформ и пробы при экстракции липидов (см. 4.6.12.1,
4.6.12.2), см3;
V2 -
объем раствора минерализата экстрагированных липидов в растворе соляной кислоты
массовой концентрацией 27-30 г/дм
3
(см. 4.6.13.2), см3;
100
- коэффициент пересчета массовой доли сухих веществ пробы в процен- тах в относитель
ные единицы;
М
- масса пробы, взятая для анализа, г;
Уз - объем этанол-хлороформного экстракта, взятый для последующего выпаривания и мине
рализации экстрагированных липидов (см. 4.6.12.3), см3;
6