ГОСТ 31664—2012
6.2 Подготовка испытуемой пробы
Если кислотность пробынеболее 3.0 %, пробу очищают, пропуская ее черезокись ал юминия по7.2.
Если кислотность более 3.0 %, вначале нейтрализуют пробу гидроокисью натрия вприсутствии раство
рителя по7.1, затем очищают ее. пропуская через окись алюминия.
6.3 Приготовление проявляющего растворителя
Готовят смесь, состоящую из 70 см3гексана или петролейного эфира. 30 см3 этилового эфира и
1см3муравьиной кислоты с объемной массой не менее 98 % или уксусной кислоты.
7Выполнение измерения
7.1 Нейтрализация пробы гидроокисью натрия
Растворяют (10 ± 1) гиспытуемой пробы в100 см3гексана илилегкого петролейного эфира ипере
носят раствор в делительную воронку. Добавляют 50 см3 изопропилового или этилового спирта,
несколькокапельрастворафенолфталеинаиобъемрастворагидроокисинатрия
c(NaOH) = 0,5 моль/дм3, эквивалентный содержанию свободных жирных кислот жира или масла, с
избытком 0.5 %. Тщательно перемешивают втечение 1 мин идобавляют 50 см3воды, вновь перемеши
вают идают отстояться. После разделения слоев сливают нижний слой, содержащий мыло, ипромежу
точныеслои (слизистыеинерастворимыевещества). Нейтрализованный раствор вворонке промывают
последовательными порциями по 25 см3 50 %-ного раствора изопропилового или этилового спирта до
техпор, пока розовый цветфенолфталеина не исчезнет. Переносят раствор вколбу ротационного испа
рителя ивыпариваютбольшуючасть растворителя под вакуумом. Высушивают масло при 30 °С—40 °С
под вакуумом втоке азотадо тех пор. пока растворитель не будет удален полностью.
7.2 Очистка пробы пропусканием чорез окись алюминия
Готовят суспензию 15 гактивированной окиси алюминия в50 см3гексана илилегкого петролейного
эфира изаполняют ею при постукивании хроматографическую колонку. Убедившись, что окись алюми
ния ровно заполнила колонку, оставляют слой растворителя на 1—2 мм выше верхнего уровня адсор
бента. Растворяют 5 г испытуемой пробы в 25 см3 гексана или легкого петролейного эфира,
нейтрализуют раствор, если необходимо, иосторожно приливаютего вколонку. Собирают весьэлюат в
круглодонную колбу вместимостью 100 см3. Удаляют большую часть растворителя выпариванием в
ротационном испарителе под вакуумом, затем высушивают остаток при 30 °С—40 еС под вакуумом в
токе азота до тех пор. пока растворитель не будет удален полностью.
7.3 Гидролиз триглицеридов
7.3.1 Взвешивают (0.1 ± 0.01) гочищенной испытуемой пробы впробирке для центрифугирования
вместимостью 10 см3. Если проба не является жидкой при комнатной температуре, помещаютпробирку
вячейкуводяной бани притемпературе 60 °С—65 °C. Если при этом проба нерасплавится полностью, ее
продолжают выдерживать вбане, но не более 10 с. Вынимают пробирку из водяной бани и продолжают
выполнять вбыстрой последовательности испытания всоответствии с 7.3.2—7.3.5.
7.3.2 Добавляюткжидкой пробепредварительно взвешенные 20 мг липазы и2 см3буферного рас
твора. Осторожно встряхивают идобавляютпоследовательно 0.5 см3раствора холата натрия и0.2 см3
раствора хлорида кальция.
Закрывают пробирку пробкой, осторожно встряхивают и сразу же помещают пробирку в ячейку
водяной бани при40 °С. выполняя ручное встряхивание втечение(60 ± 2)с. Всеоперациидоначала руч
ного встряхивания должны быть выполнены за 30 с.
7.3.3 Извлекают пробирку из водяной бани и интенсивно встряхивают при 40 °С в течение
(120
1
2) с. используя встряхиватель.
7.3.4 Немедленно после встряхивания приливают1см3соляной кислоты и1см3этиловогоэфира.
Закрывают пробкой и интенсивно встряхивают на встряхивателе.
7.3.5 Центрифугируют содержимое пробирки и переносят органическую фазу в пробирку для
испытания с помощью шприца. Если проба была твердой при комнатной температуре, повторяют экс
тракцию с еще 1см3этиловогоэфира и объединяют экстракты впробирке для испытания.
7.4 Отделение 2-моноглицеридов
7.4.1 Подготовка пластинок
Тщательноочищаютстеклянные пластинки 95 %-ным этиловым спиртом.гексаном или легким пет-
ролейным эфиром иацетономдо тех пор. пока жировые вещества не будут удалены полностью.
4