ГОСТ ISO 22118-2013
4.4.1.2 Минимальные требования к специфичности
Различные последовательности целевых микроорганизмов или вирусов должны быть
определенысаналогичнойэффективностьюамплификации,дажееслиразличияв
последовательностях праймеров и сайтов связывания образцов представлены как указанные в
области применения метода.
По возможности должно быть проанализировано не менее 50 штаммов целевых
микроорганизмов или вирусов.
4.4.2 Тест на избирательность
4.4.2.1 Общие положения
Должны быть представлены эмпирические результаты тестирования метода на нецелевых
микроорганизмах или вирусах. Проверка должна проводиться как с таксономически родственными,
так и с таксономически неродственными микроорганизмами или вирусами. Метод должен четко
различать целевые и нецелевые микроорганизмы и вирусы.
4.4.2.2 Тест-системы для определения бактерий
Необходимо выбрать минимум 30 штаммов, которые могут мешать определению целевых
микроорганизмов,и штаммов пищевых микроорганизмов, которые естественным образом
присутствуют в каждом исследуемом пищевом материале. Примеры соответствующих данным
требованиям организмов приведены в приложении А.
При необходимости должны быть включены вирусы, например, при наличии гомологичных
последовательностей олигонуклеотидов вирусной нуклеиновой кислоты.
В тест-системе должно присутствовать, по меньшей мере. 90 % бактерий. Остальные штаммы
должны быть представлены грибами, плесенью и вирусами
Для селективного теста должны использоваться хорошо определяемые количества ДНК,
например. ДНК 106 клеток. Соответствие ДНК, используемой для амплификации, должно быть
подтверждено, например, системой ПЦР. основанной на рибосомальной ДНК
4.4.2.3 Тест-системы для выявления грибов
Необходимо выбрать минимум 30 штаммов нецелевых микроорганизмов или вирусов.
Для валидации тест-системы для определения грибов 90 % штаммов должны быть
представлены грибами. Остальные штаммы должны быть представлены бактериями или вирусами.
Вирусы должны быть включены при необходимости, например, при наличии гомологичных
последовательностей олигонуклеотидов вирусной нуклеиновой кислоты.
Для селективного теста должны использоваться хорошо определяемые количества ДНК,
например. ДНК 106 клеток. Соответствие ДНК. используемой для амплификации, должно быть
подтверждено, например, системой ПЦР, основанной на рибосомальной ДНК.
4.4.2.4 Тест-системы для обнаружения вирусов
Для валидации тест-системы для определения вирусов, по крайней мере, три нецелевых
вирусных штамма должны быть включены.
Для селективного теста должны использоваться хорошо определяемые количества ДНК.
например. ДНК 10ь клеток. Соответствие ДНК. используемой для амплификации, должно быть
подтверждено, например, системой ПЦР. основанной на рибосомальной ДНК.
4.5 Чувствительность
4.5.1 Общие положения
Для проверки эмпирических результатов метода в различных концентрациях необходимо
использовать доступные методики проверки, и они должны быть описаны в отчете о проверке.
4.5.2 Минимальные требования к чувствительности для качественного испытания
Пищевые патогены, которые требуют качественного тестирования, должны быть обнаружены
на уровнях 1 клетка на 10 клеток, при исследовании бактерий и паразитов, и 10 частиц на 100 частиц
эквивалентов генома вирусов, в определенном количестве исследуемого образца пищевого продукта.
Применяемые концентрации связаны с количеством пищевых патогенов до начала процедуры
обнаружения (в том числе после обогащения).
П р и м е ч а н и е - Реакция чувствительности отличается от чувствительности метода.
Реакция чувствительностиможет точно определяется количеством нуклеиновойкислоты,
используемом в качестве шаблонов. Чувствительности метода, помимо всего прочего, зависит от
эффективности экстракции нуклеиновой кислоты.
Испытания проводятся на образцах, содержащих фоновую микробиологическую флору,
имеющую отношение к пищевой продукции.
Оценка чувствительности должна включать в себя пять различных категорий продуктов
питания.
4.5.3 Минимальные требования к чувствительности для количественного испытания
Должны быть предоставлены верхний и нижний пределы линейного диапазона метода.
3