ГОСТ 32251—2013
Афлатоксин В, элюируют посредством двухэталной процедуры:
а) наносят 0,50 см3 метанола на иммумоаффинную колонку и дают ему пройти под действием
силы тяжести. Элюат собирают в мерную колбу вместимостью 5 см3(см. 6.6);
б) ждут 1 мин и наносят 1,25 см3 метанола. После того как большая часть метанола прошла
под действием силы тяжести, собирают оставшуюся часть элюата, пропуская воздух под давлением.
10.4 Проведение ВЭЖХ
10.4.1 ВЭЖХ следует проводить по одному из двух вариантов. Рекомендуется проведение
ВЭЖХ по варианту 1 (см. 10.4.2), но он требует применения соответствующего флуоресцентного де
тектора и инжекционной системы. Вариант 2 (см. 10.4.3) применяют только в том случае, если сигнал
детектора не достаточен, чтобы гарантировать требуемое относительное стандартное
отклонение (см. 6.9), при этом проводят дополнительный этап выпаривания.
10.4.2 Вариант 1
Собранный в мерную колбу вместимостью 5 см3 элюат (см. 10.3) доводят до метки водой и
хорошо встряхивают. Если раствор прозрачный, его можно непосредственно использовать для
ВЭЖХ. Если раствор не прозрачный, то перед инжекцией его пропускают через одноразовую филь
тровальную установку. Инжекция в режиме полной петли гарантирует максимальную точность. Реко
мендуется. в зависимости от инжекционной системы (например, шприц или автосемплер), брать рас
твор объемом в 3 раза больше размера инжекционной петли и инжектировать в клапан как минимум
2/3
этого объема для гарантии, что средняя доля останется в инжекционной петле. Таким образом, петля
промывается инжекционным растворителем и в клапане остается достаточно этого раствори теля.
10.4.3 Вариант 2
Метаноловый элюат, содержащий афлатоксин В,, собирают из иммуноаффинной колонки в
промытую кислотой стеклянную пробирку. Элюат выпаривают до сухости под мягкой струей азота при
(40 ± 5) °С. Повторно растворяют выпаренный остаток в водном растворе метанола объемной долей 35
%. Для растворения используют точно такой же объем, который использовался для выпаренных
остатков градуировочных растворов (см. 9.7.3.2). Объем для повторного растворения будет зависеть
от размера инжекционной петли. Для инжекции используют режим полной петли, как описано в вари
анте 1 (см. 10.4.2).
10.4.4 Послеколоночная дериватизация
10.4.4.1 Если используют РВРВ. то к выходу разделительной колонки подсоединяют устрой
ство послеколоночиой дериватизации. для чего устанавливают смешивающий тройник и реакционную
трубку (см. 6.11.1). затем проводят реакцию при скорости течения:
-1,00 см3/мин подвижной фазы А по 9.3;
- 0,30 см3/мин раствора по 9.5.
10.4.4.2 Если проводят электрохимическую дериватизацию с бромистым калием, то следуют
инструкциям изготовителя для установки ячейки и проводят роакцию, используя следующие пара
метры:
а) скорость течения: 1,00 см3/мин подвижной фазы Б по 9.4;
б) ток: 100 мкА.
10.4.5 Проводят регистрацию сигнала с помощью флуоресцентного детектора. Идентифика
цию пика афлатоксина В, на хроматограмме проводят путем сравнения значений времен удержива
ния афлатоксина В, в пробе и в стандарте.
10.5 Построение градуировочной зависимости
Градуировочную зависимость строят на основе результатов анализа ВЭЖХ градуировочных
растворов по 9.7.3.1 и 9.7.3.2. Для стандартных растворов и экстрактов анализируемых проб должен
инжектироваться один и тот же объем. С помощью программного обеспечения на основе персональ
ного компьютера строят градуировочную зависимость и проверяют ее линейность.
Градуировочные растворы охватывают диапазон содержания афлатоксина В( в анализируемой
пробе от 0.5 до 5.5 мкг/кг. Если содержание афлатоксина В, в анализируемой пробе выходит за градуи
ровочный диапазон, должна быть построена другая, подходящая градуировочная зависимость или ин-
жекционный раствор для анализа ВЭЖХ разбавляют до содержания афлатоксина В,,
соответствующе го установленному градуировочному диапазону.
При отсутствии программного обеспечения строят график, нанося по оси х сигналы (высота или
площадь) относительно массовой концентрации афлатоксина В, (нм/см3) по оси у. Используя линейную
регрессию, определяют градуировочную кривую по этим данным. Чтобы вычислить массовую концен
трацию афлатоксина В, в измеренном растворе испытуемой пробы, нг/см3, используют результирую
щую функцию
у = ах*Ь(2)
7