ГОСТ 32251—2013
Т а б л и ц а 1- Приготовление рабочих градуировочных растворов
Рабочий стан-
дартный рас
твор
Вариант 1
ОбъемМассовая концентра
градуировочного ция афлатоксина Bi
раствора(см 9.7.2). нг/см3
мм3
Вариант 2
Объем Массовая концентрация
градуировочного афлатоксина В,, нг/см3
раствора(см.9.72),
мм’
1200,0501000.250
2700.175 3500.875
3 1200.300 6001.500
4 1700.425 8502.125
5 2200.550 11002.750
Далее приготовление рабочих градуировочных растворов проводят по 9.7.3.1 или 9.7.3.2.
9.7.3.1 Вариант 1 (см. 10.4.2)
В каждую колбу добавляют по 7 см3метанола. Дают афлатоксину В, раствориться, затем раз
бавляют до метки водой и хорошо взбалтывают.
П р и м е ч а н и е — Объемы метанола и воды уменьшаются при смешивании.
9.7.3.2 Вариант 2 (см. 10.4.3)
В каждую колбу добавляют приблизительно по 10 см3 метанола. Дают афлатоксину В( рас
твориться. затем разбавляют чистым метанолом (см. 5.7) до метки и хорошо взбалтывают. Затем пе
реносят точно по 1 см3 каждого рабочего градуировочного раствора в промытые кислотой стеклянные
пробирки, выпаривают до сухости согласно варианту 2 (см. 10.4.3). Затем выпаренные остатки граду
ировочных растворов повторно растворяют в точно таком же объеме, который будет использоваться
для повторного растворения экстрактов проб перед их инжекцией (см. 10.4.3). Вычисляют массовую
концентрацию афлатоксина В,, нг/см3. после выпаривания и повторного растворения. Эти значения
массовой концентрации используют для вычислений в разделе 11. В этом случае градуировочный
диапазон останется неизменным.
10 Проведение испытания
10.1 Кондиционирование иммуноаффинной колонки
Методы для кондиционирования, нанесения, промывки и элюирования слегка отличаются у
разных иммуноаффинных колонок, поэтому следует пользоваться инструкциями изготовителей. Если
нет других указаний, на иммуноаффинную колонку наносят 10 см3 PBS (см. 9.1) и дают ему пройти
через колонку со скоростью 2-3 см/мин (под действием силы тяжести). Необходимо, чтобы неболь
шая порция (0.5 см3) PBS оставалась на колонке до нанесения экстракта пробы.
10.2 Экстракция
На весах (см. 6.14) взвешивают (50 ± 0.1) г пробы, подготовленной в соответствии с разделом
8. и помещают в колбу Эрленмейера. Добавляют 250 см3раствора для экстракции (см.9.2). Интенсив
но встряхивают вручную первые 15 - 30 с. затем в течение 30 мин с помощью аппарата для встряхива
ния. Фильтруют экстракт, используя предварительно фальцованную фильтровальную бумагу (см.
6.21). Пипеткой (см. 6.15) отмеряют 5.0 см3 прозрачного фильтрата в мерную колбу вместимостью
100 см3(см. 6.6.) и разбавляют до метки PBS (см. 9.1) или водой (см. 5.2). Разбавитель (PBS или во да)
выбирают согласно инструкции изготовителя иммуноаффинной колонки. Если нет иных указаний, то
для разбавления следует использовать PBS.
Если раствор прозрачный, то разбавленный раствор можно непосредственно наносить на ко
лонку.
Если раствор не прозрачен, его фильтруют через фильтр из стеклянного волокна (см. 6.22) и
переносят точно 50 см3прозрачного фильтрата в резервуар (см. 6.2), который помещают на кондици
онированную иммуноаффинную колонку.
Фильтрат наносят на иммуноаффинную колонку по 10.3.
10.3 Иммуноаффинная очистка
Фильтрат пропускают через иммуноаффинную колонку с объемной скоростью подвижной фа
зы приблизительно 1 капля в секунду (3 см3/мин). Нельзя допускать скорость потока более 5 см3/мин.
Промывают иммуноаффинную колонку, используя приблизительно 20 см3 воды (см. 5.2), наносимой
двумя порциями примерно по 10 см3при скорости потока 3 см3/мии. Сушат, применяя легкий вакуум, в
течение 5-10 с или пропускают воздух через колонку шприцем в течение 10 с.
6