ГОСТ19496— 2013
9.1.9 Приготовление 1 %-ного раствора аммиака
В стакане вместимостью 250 см3по ГОСТ 25336 смешивают 8 см325 %-ного водного раствора
аммиака и 192 см3дистиллированной воды.
Срок хранения раствора в сосуде с притертой пробкой при комнатной температуре - 6 мес.
9.1.10 Приготовление раствора Судана
0.3 г сухого Судана III или IV помещают в стакан объемом 150 см3, растворяют в 100 см3 70
%-ного спирта и нагревают на комбинированной бане до закипания. Кипятят не более 5 мин. затем
охлаждают и фильтруют. Рекомендуется выдержать раствор в течение нескольких дней при темпера
туре 37 °С.
Срок хранения раствора в сосуде с притертой пробкой при комнатной температуре - 6 мес.
П р и м е ч а н и е — Приготовление реактивов и красителей, не приведенных в настоящем стандарте,
проводят по общепринятым методикам.
9.2 Подготовка образцов к исследованию
Отобранные образцы перед исследованием подвергают обработке в следующей последова
тельности: фиксация, промывка проточной водой, уплотнение образцов, изготовление срезов, окрас ка
срезов, заключение срезов под покровное стекло.
9.2.1 Фиксация образцов
Отобранные образцы с этикетками помещают в раствор формалина с массовой долей фор
мальдегида 10 %. взятый в десятикратном объеме кобъему фиксируемых образцов, и плотно укупо
ривают. Время фиксации при температуре (22 ± 1) °С составляет 24 ч. Понижение температуры фик
сации на 10 °С увеличивает продолжительность фиксации в два раза.
Образец, фиксированный в достаточной степени, должен быть равномерно уплотненным и
иметь одинаковый вид как на внешней поверхности, так и на свежем разрезе.
Фиксированные образцы хранят при температуре (22 ± 1) °С в плотно закрытой посуде в рас
творе формалина с массовой долей формальдегида 10 % в течение трех лет.
9.2.2 Промывка образцов
Зафиксированные образцы помещают в колбу или стакан по ГОСТ 25336 и через вставленную
стеклянную воронку промывают холодной проточной водой в течение 15 мин. Если материал доста
точно плотный, срезы изготавливают на замораживающем микротоме сразу же после промывки.
9.2.3 Уплотнение образцов
При получении срезов из образцов мясопродуктов высокой рыхлости (неустойчиво удержива
ющие форму) используют их пропитывание в желатине. Для этого после завершения фиксации из
образцов вырезают кусочки размером 15 * 15 * 4 мм и промывают водой.
Хорошо промытые кусочки пропитывают 12.5 %-ным раствором желатина в течение 6 ч. потом
25 %-ным раствором желатина в течение 12 ч в термостате при температуре 37 ®С. Затем кусочки
раскладывают в чашки Петри по ГОСТ 25336. заливают их свежим 25 %-ным раствором желатина и
быстро охлаждают в холодильнике при температуре (5 ± 1) °С. После охлаждения кусочки уплотняют
в растворе формалина с массовой долей формальдегида 20 % в течение 12 ч. Перед резкой на мик
ротоме кусочки промывают в соответствии с 9.2.2.
Срок хранения кусочков в растворе формалина с массовой долей формальдегида 10
%
при
комнатной температуре - 1 год.
9.2.4 Изготовление срезов
Из фиксированных образцов из разных участков вырезают не менее трех кусочков размером
около 15 * 15*4 мм. На замораживающем микротоме готовят срезы толщиной от 10 до 30 мкм.
С микротомного ножа с помощью тонкой кисточки срезы переносят в кристаллизационную
чашку по ГОСТ 25336 или чашку Петри по ГОСТ 25336 с водопроводной водой. Под неповрежденный
срез быстро подводят предметное стекло, обработанное яичным белком с глицерином. Срез извле
кают из воды на середину стекла, удерживая его там препаровальной иглой. Срез должен быть непо
врежденным.
9.2.5 Окрашивание срезов гематоксилин-эозином (общая окраска)
На первом этапе срезы окрашивают квасцовым гематоксилином Эрлиха в течение 3-4 мин и
промывают 2 мин в воде. Для удаления избытка гематоксилина срезы опускают в 1 %-ный раствор
соляной кислоты (солянокислая вода) по ГОСТ 3118 до появления розовой окраски, затем в 1 %-ный
раствор аммиака до появления синего окрашивания и промывают водой в течение 2 мин. Докраши
вают срезы 1 %-ным водно-спиртовым раствором эозина в течение 1 мин и ополаскивают водопро
водной водой. После этого срезы заключают под покровное стекло.
6