ГОСТ 32365—2013
Срок хранения раствора при температуре (4 ± 1) еС - не более 24 ч.
7.3.6 Приготовление раствора этилового спирта
0.060 г этилового ректификованного спирта высшей очистки вносят в мерную колбу с пришлифо
ванной пробкой вместимостью 1дм3 и доводят объем до метки дистиллированной водой.
Срок хранения раствора при температуре (4 ± 1) вС - не более 1 мес.
7.3.7 Проверка активности реактивов
7.3.7.1 Проверку активности ферментов проводят при приготовлении каждой новой порции ре
активов. хранении готовых реактивов без использования более двух недель или нарушении условий
хранения.
7.3.7.2 Для проверки активности ферментов в две фотометрические кюветы последовательнодо
зируют по 3.0 см3 реакционной смеси по 7.3.5. Затем в кювету No 1*OHtp (А1комр) добавляют 0.1 см3
дистиллированной воды, а в кювету No 2посо (А,Пров) - 0.1 см3 раствора этилового спирта по 7.3.6.
Содержимое кювет перемешивают пластиковым шпателем и оставляют при температуре от 20 С до 25
С на 3 мин (по секундомеру). Измеряют оптическую плотность полученного раствора относительно
оптической плотности воды.
Затем в обе кюветы добавляют по 0,05 см3суспензии АДГ по 7.3.4. Содержимое кювет переме
шивают пластиковыми шпателями и оставляют при температуре от 20 С до 25 С на 15 мин (по секун
домеру). Измеряют оптическую плотность содержимого в кювете No 1K0Htp (AUoHTp) и No 2Пров (A2npoe
) относительно оптической плотности воды.
7.3.7.3 Обработка и оформление результатов измерений
Изменение оптических плотностей, которые вызваны окислением этилового спиртадо ацетальде
гида и уксусной кислоты (дА) вычисляют по формуле
АА = (А2пр<,в- А1пров)- (A2t0„ Tp- А1к0Н1р).
(
6
)
где А2прао - оптическая плотность реакционной смеси с АДГ в кювете No 2пр00.;
А1пров- оптическая плотность реакционной смеси в кювете No 1пров;
А2коитр - оптическая плотность реакционной смеси с АДГ в кювете No 2tomp;
А
1
контр ~ оптическая плотность реакционной смеси в кювете No 1коитр.
Массовую концентрацию этилового спирта в растворе по 7.3.6 Х3. г/дм3, вычисляют по формуле
V.M
3
sd
2
^
-100
X,--------!---------АА
(7)
где V, - общий объем раствора в кювете по 7.3.7.2. см3; V, = 3.15 см3;
М - молярная масса этилового спирта, г/моль; М = 46.07 г/моль.
е- молярный коэффициент поглощения НАДН. дм3-см’1 ммоль’1;
z = 6.30 при длине волны 340 нм;
z = 3.40 при длине волны 334 нм;
£= 6.18 при длине волны 360 нм;
d - толщина поглощающего слоя в кювете, см; d = 1 см;
2 - количество молекул НАДН, образующихся при окислении 1 молекулы этилового спирта;
V2- объем раствора этилового спирта в кювете по 7.3.7.2. см3; V2 = 0.1 см3;
1000 - коэффициент пересчета моль в ммоль;
ДА - изменение оптических плотностей, рассчитанное по формуле (6).
Вычисления проводят до третьего десятичного знака.
Измеренное содержание этиловогоспирта в растворе по 7.3.6должно составлять (0,057 ± 0.003) т1
дм3. Если содержание этилового спирта составляет менее (0.057 ± 0.003) г/дм3, то измерение следует
повторить со свежеприготовленными растворами реактивов.
7.3.8 Приготовление раствора ароматизатора
Пробу жидкого или пастообразного ароматизатора, взвешенную с записью результата до четвер
того десятичного знака, вносят в мерную колбу и доводят объем до метки дистиллированной водой.
Массу пробы, вместимость колбы и коэффициент разбавления выбирают таким образом, чтобы массо
вая концентрация этилового спирта в анализируемом растворе была в интервале от 0.02 до 0.12 г/дм3
(см. таблицу 3).
8