ГОСТ 32015—2012
элюирования не более двух капель в секунду. Промывают картридж последовательно 2 см3 деионизо
ванной воды. 10 см3раствора метанола и деионизованной воды, взятых в соотношении 20 : 80, 5 см3
раствора метанола и деионизованной воды, взятых в соотношении 40 :60. Элюируют аналиты 10 см3
раствора метанола идеионизованной воды, взятых в соотношении 80 : 20. Упаривают элюат на ротаци
онном испарителе при температуре от 45 °С до 48 °Сдо 1или 1,5 см3. Водный остаток очищают методом
ВЭЖХ.
7.3 Очистка методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
7.3.1 Систему ВЭЖХ с бинарным градиентом испектрофотометрическимдетектором подготавли
вают в соответствии с руководством по эксплуатации прибора. Вместо петли инжектора устанавливают
предколонку С18. Разделение анаболических стероидов и производных стильбена проводят на анали
тической колонке С18 (250 мм х4.6 мм * 5 мкм). При этом соблюдают следующие хроматографические
условия:
- подвижная фаза: А — метанол 30 %. Б — вода 70 %;
- градиент до 100 % подвижной фазы А к 10 мин. с 10до 15 мин — 100 % А. с 15 до 23 мин соотно
шение А1Б — 30/70;
- скорость потока подвижной фазы — 1 см3/мин.
7.3.2 Порядок элюирования анаболических стероидов и производных стильбена: тренболои
(7,0 мин), нортестостерон. транс-диэтилстильбэстрол. этинилэстрадиол. гексестрол, диенэстрол. эстра
диол. тестостерон, метилтестостерон. цис-диэтилстильбэстрол, прогестерон (11.5 мин). Времена
удер живания уточняют после предварительного анализа стандартного раствора концентрации 1
мкг/см3для каждого аналита при спектрофотометрическом детектировании 254 нм. Время отбора
интересующей фракции должно быть больше на 1 мин времени удерживания последнего аналита.
7.3.3 В положении Load инжектора пропускают через предколонку0.5 см3деионизованной воды, а
затем водный остаток пробы после ТФЭ очистки. Переводят инжектор в положение Inject и собирают
фракцию, соответствующую временам удерживания анаболических стероидов и производных стильбе
на. Полученную фракцию анаболических стероидов и производных стильбена после ВЭЖХ упаривают
досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 45 °С. Сухой остаток растворяют в 1 см3
абсолютного этанола и переносятво флакон вместимостью 4 см3. Упаривают этанол досуха в токе азота
на нагревательном модуле при температуре 40 °С.
7.4 Дериватизация анаболических стероидов и производных стильбена
7.4.1 Для получения триметилсилиловых производных анаболических стероидов и производных
стильбена к сухому остатку после ВЭЖХ очистки пипеточным дозатором приливают 50 мм3раствора
МСТФАЯМИС/ДТЭ (6.3.5). Помещают флаконы в нагревательный модуль на 60 мин при температуре 60
’С. Реакционную смесь переносят в стеклянные флаконы вместимостью 2 см3 с вставками на 100
мм3и используют для ГХ-МС анализа.
7.4.2 Для получения пентафторпропионовых производных анаболических стероидов и производ
ных стильбена к сухому остатку после ВЭЖХ очистки пипеточным дозатором приливают 200 мм3ацето
на и 50 мм3 пентафторпропионового ангидрида. Помещают флаконы в нагревательный модуль на
60 мин при температуре 60 °С. Реакционную смесь упаривают досуха в токе азота на
нагревательном модуле при температуре 40 °С. Сухой остаток растворяют в 50 мм3изооктана,
переносят в стеклянные флаконы вместимостью 2 см3с вставками на 100 мм3и используют для
анализа.
7.4.3 Данный метод дериватизации используют для получения метилоксим/триметилсилиловых
(МО/ТМС) производных тренболона и других кетостероидов. При этом к сухому остатку после ВЭЖХ
очистки пипеточнымдозатором приливают 100 мм32 %-ного раствора метоксиламин гидрохлорида в су
хом пиридине (6.3.6). Полученную реакционную смесь помещают на нагревательный модуль при темпе
ратуре 60 SC на 30 мин. По истечении указанного времени реакционную смесь упаривают досуха в токе
азота. Ксухому остаткудобавляют 100 мм3БСТФА с 1 мм3 ТМХС и помещают в нагревательный модуль
при температуре 60 °С на 60 мин. Реакционнуюсмесь упаривают досуха в токе азота на нагревательном
модуле при температуре 40 °С. Сухой остаток растворяют в 50 мм3изооктана с 5 % реакционной смеси
БСТФА/ТМХС, переносят в стеклянные флаконы вместимостью 2 см3 с вставками на 100 мм3и исполь
зуют для ГХ-МС анализа.
7.5 ГХ-МС анализ
7.5.1В инжектор хроматографа вводят от 1до 5 мм3пробы и проводят анализ в условиях, указан
ных в 6.5. При этом для каждого образца проводят не менее двух определений.
ю